[每周一例]大黄鱼白鳃白肝，检出大黄鱼虹彩病毒

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[病例713]浙江宁波市六横岛一网箱大黄鱼养殖基地，该养殖基地共13个养殖框（16式30通框），共计320个小框（框规格：5m×5m×10m）（图1），2023年5月中旬从福建宁德转运平均规格6两/尾的大黄鱼中苗（养殖1年零三个月）共计80万尾放养至该养殖基地，放养密度为5000尾/小框，投喂冰鲜，投饵率约7%，每天下午4点投喂1餐。5月末，该养殖基地水温上升至23℃，采样框（16通框）开始出现零星白鳃、死鱼情况，刚开始几尾，严重时每天死鱼40多尾。
       进入6月份，每天死鱼40尾左右，据“小飞碟”测定数据，当月水温22.5℃～23.2℃，溶解氧5.8mg/L～7.5mg/L（“小飞碟”安装在1.5m～2m水位）。
       6月19日，采样框发病加重，当天死鱼70多尾。
       6月20-25日均大潮，每天死鱼数量上升至100多尾。25日上午10点到该养殖基地调查，网箱中可见发病鱼在水面缓慢游动，“浮头”，或漂浮于水面，体表完好，体色偏白（图2）；取漂浮水面的病鱼检查鳃丝完好但发白，呈贫血状态（图3）；从网箱中取6尾慢游和漂浮的病鱼，外观病鱼体表完好，体色发白（图4）；解剖6尾病鱼鳃均发白，呈贫血状态；肝脏发白肿大（图5）；脾脏肿大发黑（图6）；肾脏肿大，剪开肾脏无血液，全是组织液样液体（图7）；脑组织无明显异常（图8）。分别取6尾病鱼（病鱼编号2-1～2-6）的鳃做寄生虫检查，从肝脏、肾脏和脑中接种加10%胎牛血清的脑心浸液琼脂（BHIA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织用4%的甲醛固定做组织病理切片观察；取5尾病鱼（病鱼编号2-1～2-5）的鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织用95%酒精固定做病毒检测。
       同时从临近未发病网箱取4尾鱼，其中2尾鳃发白（鱼编号3-1，3-2），2尾鳃正常（鱼编号4-1，4-2），解剖见肝脏肿大、轻微发白，其它组织器官无明显异常。分别取4尾鱼的鳃做寄生虫检查，从肝脏、肾脏和脑中接种加10%胎牛血清的脑心浸液琼脂（BHIA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织分别用95%酒精和4%的甲醛固定带回公司研究所一室做病毒检测和组织病理切片观察。
       结果：镜检所取10尾鱼的鳃均未发现寄生虫感染。接种的加10%胎牛血清的BHIA培养皿分别经28℃和37℃培养36h，所采取的10尾鱼中仅1尾鱼（未发病网箱鳃发白的鱼，编号3-1）的肝脏和肾脏中分离出少量假单胞菌，其它鱼的肝脏、肾脏和脑中均未分离出病原菌（图9、图10、图11）。采用实验室普通PCR检测方法，对采集鱼的鳃和内脏组织（肝脏、脾脏和肾脏）进行真鲷虹彩病毒（RSIV）检测，结果均为阴性（图12）；采用实验室普通RT-PCR检测方法，对采集鱼的脑组织进行神经坏死病毒（VNNV）检测，结果均为阴性（图13）；采用实验室普通PCR检测方法，对采集鱼的鳃和内脏组织（肝脏、脾脏和肾脏）进行大黄鱼虹彩病毒（LYCIV）检测，结果鳃发白的病鱼（编号2-1～2-5）均为阳性，正常网箱鳃发白的鱼（编号3-1，3-2）呈阳性，正常网箱鳃正常的鱼（编号4-1，4-2）呈阴性（图14）；采用实验室荧光定量PCR检测方法进行大黄鱼虹彩病毒检测，2-1号鱼Ct值为17.49；2-2号鱼Ct值为26.84；2-3号鱼Ct值27.82；为2-4号鱼Ct值27.96；为2-5号鱼Ct值为28.03；3-1号鱼Ct值为28.50；3-2号鱼Ct值为28.44；4-1号鱼Ct值为31.44，4-1号鱼Ct值为31.28（图15），均呈阳性，但鳃发白越严重的病鱼，Ct值越低，组织中病毒粒子含量越高。
       组织病理切片结果显示病鱼肝脏轻度脂肪变性、水样变性，少量细胞散在坏死，少量色素沉积；脾脏细胞弥散坏死，组织轻度淤血，可见数个结节性坏死灶，大量色素沉积，较多黑色素巨噬细胞中心；肾脏数个结节性坏死灶，局部轻微淤血，少量细胞散在坏死，少量色素沉积，少量黑色素巨噬细胞中心；鳃组织坏死严重，上皮细胞弥散坏死、脱落严重，鳃丝间多量脱落、坏死细胞，鳃小片弯曲；脑组织未见明显异常（图16）。正常养殖框的鱼也有不同程度的病变，但病变较轻。
       6月26日，采样框死鱼上升至400尾。
       6月27-29日，停料，每天死鱼300多尾。
       7月6日，回访，近期该养殖基地养殖的大黄鱼损耗严重，除采样框白鳃死亡严重以外，其它养殖框大黄鱼也陆续出现白鳃死亡，目前放养的13个养殖框均有大黄鱼白鳃死亡。

       分析：1、大黄鱼是福建省养殖最多的海水鱼类，主要采取普通网箱养殖和深海网箱养殖两种养殖模式，近年来，高温期被养殖户称之为“白鳃病”的危害日益严重，幼鱼到成鱼均可发病，病死率约30%，严重者可达70%。
       2、本病例流行病学调查发现大黄鱼“白鳃病”具有传染性，其发病症状与何爱华（1999），陈新华（2005）等报道的大黄鱼虹彩病毒症状一致，实验室通过普通PCR和荧光定量PCR两种检测方法结果显示患“白鳃病”的大黄鱼均呈阳性，且白鳃越严重的病鱼组织扩增条带越亮、Ct值越小，病毒粒子含量越高，证实“白鳃病”与大黄鱼虹彩病毒（Large yellow croaker iridovirus，LYCIV）感染有关。（利洋公司研究所一室 雷燕 区燕云 张会军 肖冬娇 利洋水产药店 城澳店 陈世豪 邓志强 提供 2023.10.12）

tangsl

大黄鱼虹彩病毒（Large yellow croaker iridovirus，LYCIV），也是细胞肿大属的虹彩病毒，以前用真鲷虹彩病毒的引物做PCR检测不出来，真鲷虹彩病毒也能造成白鳃白肝。

hanfj

“白鳃白肝”，可能是因为病毒破坏了脾肾的等造血器官，导致贫血发白

tangsl

hanfj 发表于 2023-12-21 14:55
“白鳃白肝”，可能是因为病毒破坏了脾肾的等造血器官，导致贫血发白

有报道病毒可以破坏大黄鱼内脏组织的结构与功能，特别是使脾脏组织等造血器官，造成内脏组织中的血细胞发生严重退行性变化，从而导致全身血管内的血细胞特别是红细胞稀少，使患病鱼在临床上表现出极度贫血状态。

tangsl

早期有人研究认为真鲷虹彩病毒(red sea bream iridoviral virus, RSIV)是导致“白鳃病”的主要病原；也有人运用细胞培养和组织超薄切片电镜观察认为一种RNA病毒颗粒可能是引起“白鳃病”的病原。2017年浙江海洋所报道患“白鳃病”病样组织电镜显微观察到的是直径约45~50 nm，无囊膜的病毒颗粒，为虹彩病毒。与真鲷虹彩病毒不同，真鲷虹彩病毒（RSIV）（细胞肿大属）电镜下观察是一种直径约为150~180 nm有囊膜的病毒颗粒。

tangsl

2022年浙江海洋所（上帖研究人员）和福建农林报道（外文）根据电镜观察结果，细胞质中有大量的病毒颗粒。病毒颗粒直径为150-200 nm，具有电子致密核心。将这种新型病毒命名为大黄鱼虹彩病毒Larimichthys crocea Iridovirus（LYCIV）。并得到国际病毒分类委员会的确认，该病毒分属虹彩病毒科，细胞肿大虹彩病毒属的成员，这样这个病的原因就算明确了，病名病原都确定了。