[每周一例]低温期草鱼溃烂，分离出鲁氏耶尔森氏菌（Yersinia ruckeri）

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[病例499]江苏省盐城市黄沙河镇一养殖池塘，面积53亩，平均水深1.7米，配备7台3kW的叶轮式增氧机、1台3kW的涌浪机、池塘底部有微孔增氧管（约3kW）（见图1）。2019年3月中旬一次性放自养2龄草鱼种2.2万尾（平均规格1.68斤/尾）、鲫鱼5万尾（平均规格1.5两/尾）、鳙鱼4000尾（平均规格7两/尾）、白鲢3000尾（平均规格1斤/尾）。
       3月20日，外用硫醚沙星，预防水霉病。
       3月25日，外用碘制剂消毒，预防水霉病。
       3月27日，天气闷热，开始发病，当天发现草鱼死亡4尾。
       3月28日，草鱼死亡5尾，中午改底，使用“福地安”9瓶。
       3月29日，草鱼死亡8尾。
       3月30日，草鱼死亡10尾。
       3月31日，草鱼死亡12尾，外用34瓶“永乐碘”和30包“肤友康”。
       4月1日，草鱼死亡23尾，发病期间只死草鱼，鲫鱼偶有零星死亡。下午3点半到该养殖池塘，测定水质指标：上层水溶解氧13.41mg/L，饱和度126%，水温16.6℃；下层溶解氧10.86mg/L、饱和度106%，水温14.7℃；pH值9.0、氨氮、亚硝酸盐测不出。
       从塘边取4尾游水的病鱼，检查发病鱼烂身、烂尾，个别头部发红；严重者肌肉完全溃烂穿孔（见图2、3），解剖鳃无明显异常（见图4），镜检鳃无虫，少数鳃丝贫血、挂脏。病鱼脾脏肿大发黑、肠道微红，无食（见图5）；鳔后室严重充血（见图6）；肾脏肿大（见图7）。分别从4尾病鱼的溃烂处、溃烂处肌肉、肝脏和肾脏接种进行细菌分离培养；取脾、肾组织用95%酒精固定检测病毒；取溃烂处肌肉用波恩氏固定液固定做组织病理切片观察。
       4月2日，死草鱼40尾。
       4月3日，死草鱼60尾。
       4月4日，死草鱼70尾，用碘制剂消毒。
       4月5日-9日，每天死草鱼200尾左右。整个发病期间水温较低，鱼不吃料，未进行内服治疗。
       结果：病鱼组织经实验室PCR检测草鱼出血病病毒（GCRV）呈阴性（见图8），对其它鲤科鱼类病毒如鲤春病毒血症病毒（SVC）、鲤疱疹病毒2型（CyHV-2）、锦鲤疱疹病毒（KHV）、鲤浮肿病毒（CEV）等也呈阴性。从病鱼接种胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养皿，室温（18℃）培养36小时，病鱼体表溃烂处、溃烂处肌肉、肝脏和肾脏中分离出大量细菌，其中肝脏和肾脏分离菌单一，菌落形态呈圆形、隆起、边缘整齐、有光泽、乳白色（见图9），溃烂处和肌肉处分离的细菌从菌落形态上看有3种以上细菌，分别挑取肝脏和肾脏分离菌1株，溃烂处和肌肉分离的优势菌1株，进行16S DNA测序鉴定，两株菌经鉴定均为鲁氏耶尔森氏菌（Yersinia ruckeri）；对分离菌进行药敏试验，该分离菌对“出败康”、“代金康”、“肠苷康”、“菌炎好迪”、“氟多力”等抗菌药物敏感（见图10）。肌肉组织病理切片可见组织坏死严重，多呈糜样，局部淤血、多细胞浸润，可见气泡痕迹（见图11）。

       分析：1、据资料鲁氏耶尔森氏菌主要为冷水性鲑鳟鱼类的病原菌，该菌也是鲢、鳙等其它鱼类低温期细菌性败血症的致病菌。本案例在低温期发病草鱼溃烂处和内脏器官分离到大量菌落特征一致的细菌，经初步鉴定也是该菌，常见病毒检测阴性，因此本案例可能是鲁氏耶尔森氏菌引起的发病。
       2、本病例病鱼肌肉组织病理切片可见较多气泡印迹，气泡病可能起到诱发发病或增加发病鱼死亡的作用，与发病期天气频繁剧烈变化有关。（利洋研究所一室 雷燕 戚瑞荣 王小霞 利洋水产药店黄沙河店 袁远 提供 2019.05.09）