【技术分享】病毒、病理检测取样小提示

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病毒、病理检测取样小提示

曾福才

       病毒的核酸检测和组织病理切片观察检测都是临床诊断水产养殖病害病因的辅助手段，是多年来我们公司研究所为利洋水产药店所做的重要支持服务项目。病毒检测是通过PCR来判断是否感染某种病原以及含量的高低；病理检测主要是通过切片观察细胞、组织的形态结构改变、特征性病理变化等。病毒检测样品需要用95%酒精保存，病理切片样品需要用波恩氏液或4%甲醛保存，为了保证检测的准确性，接下来为大家介绍一下取样的注意事项。
       一、所取组织块的大小与固定液的多少
       一般组织块大小为0.5cm×0.5cm×0.5cm，为了保存一些阳性样品，以备之后检测，也可以多取几块组织块。加入10倍样品体积的95%酒精或4%甲醛中，用于保存病毒的核酸或固定细胞的形态，如果固定液加少了，核酸会降解，细胞形态也会有所变化，影响检测结果。
       二、取样部位
       不同品种和不同检测项目需要取样的部位不同，这与病原的靶器官有关。如：鱼类主要取肝、脾和肾（这三个一定要有），若需要检测神经坏死病毒和弹状病毒则需要取脑和眼，检测草鱼出血病病毒需要取肠道，鲤浮肿病毒需要取鳃；甲壳类如虾类主要取肝胰腺、鳃和肠道，注意虾类肝胰腺溶解很快，尽量取活虾，并且需要将头胸甲掀开，将肝胰腺暴露到固定液中，若肝胰腺溶解（如图1），只能检测对虾白斑综合症病毒（鳃也是靶器官）和对虾肝肠胞虫（肠道也是靶器官），若检测虾传染性肌肉坏死病毒则需要取肌肉组织，蟹类取肝胰腺、鳃和肌肉即可。
       三、特殊情况取样
       如果遇到1～2cm的小鱼苗和小虾苗怎么取样？如果苗比较小而且数量比较多可以整条放进去，大一点3～5cm的鱼苗需要将腹部剪开将内脏暴露出来，虾苗需要将头胸甲打开将肝胰腺暴露出来；脾脏太小找不到或挖不到肾脏怎么办？可以将该组织所在部位都取下来放到固定液中，如肾脏可以将其连同背后的脊椎一起取；如果遇到特别的症状也可以将该组织取样做检测，如内有黄色积液的鳔，血窦以及各种增生物。
       四、标记
       在认真填写送检样品登记表的同时，还需要在瓶子上做标记，主要内容为送检品种信息和客户信息，以及采样时间、主要临床症状、联系人等信息（如图2）。
       五、其他
       1、关于泥样和水样检测对虾肝肠胞虫等病原的样品需要标记检测项目（如孢子虫、病毒），若不做标记，样品会转到研究所二室检测八大离子和重金属。
       2、寄样品前请仔细检测瓶盖是否拧紧并拍照记录信息，以防酒精泄漏模糊标记。
       3、取样后尽量快邮寄或送至研究所进行检测，尤其病理切片样品，如果时间过长，结果可能不会真实反映细胞和组织的病理变化。

图1  肝胰腺未暴露到酒精中导致溶解

图2  样品标记

（转自”利洋水产“微信平台）

hanfj

检测神经坏死病毒和弹状病毒则需要取脑和眼

素人渔夫

采样后要及时固定，组织不能太大，影响固定效果

小丑鱼

病样的采集保存效果直接影响着检测结果，保存固定不好，实验检测检测结果的准确度也会降低