《虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测》

leikunnuy · 发表于 2016-5-2 18:29:17

《虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测》

摘要： 根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei) (EHP) SSU rDNA序列设计1对特异性引物，建立并优化了EHP的SYBR Green I实时荧光定量PCR (qPCR)检测方法。结果显示，该方法在60℃的退火温度时扩增效果最好，产物的熔解曲线为1个单峰，构建的方法对8.3×101–8.3×108 copies/µl的EHP SSU rDNA片段的检测响应具有良好的线性关系，扩增产物阈值循环数(Ct)与模板起始量的对数[log(Sq)]的关系为Ct=–3.369 log(Sq)+39.364 (R2=0.992)，扩增效率为98.1%，检测灵敏度下限为8.3×101 copies/µl，在线性范围内具有良好的组内和组间重复性。对实际样品的检测表明该方法比已报道的套式PCR的检测灵敏度约高4倍。利用本方法对采集自江苏、海南和山东的3批凡纳滨对虾样品的肝胰腺组织DNA (HpDNA)中的EHP SSU rDNA进行了qPCR检测，结果显示，EHP的载量指数与对虾生长速率呈负相关关系，肝胰腺中EHP载量在103 copies/(ng HpDNA)时代表了较高的风险水平。本研究建立的qPCR方法具有特异、灵敏、快速、定量的优点，所建立的方法及检测数据可为EHP的防控提供技术参考。

摘自：《渔业科学进展》，2016，37（2）：119-126。

肝胰腺中EHP载量在103 copies/(ng HpDNA)时代表了较高的风险水平。