[每周一例] 南美白对虾“黑脚偷死”，检出偷死野田村病毒

利洋服务

[病例401] 福建省漳州市东山县西埔镇一南美白对虾养殖池塘，高位池，冬棚，面积1.8亩，平均水深1.6米，底部纳米管增氧（见图1），2016年11月13日一次性放苗50万尾，目前规格160尾/kg左右，每日三餐，两餐投喂饲料，一餐投喂冻丰年虫。
       2017年2月15日，在池塘的排污口处发现1尾死虾；
       2月16日，在排污口处发现80尾死虾，部分死虾呈现“黑脚”症；
       2月17日，在排污口处发现200尾死虾，下午3点40分到该养殖池塘调查，测定水温23.3℃，水质指标pH值8.0、氨氮0.4mg/L、亚硝酸盐0.4mg/L、溶解氧7.03mg/L，水中藻类以绿藻为主。在池塘的楼梯口处可见发病虾距水面5~10cm处游水（见图2），从池塘中部排污口处捞出大量偷死虾，偷死虾有三分之一呈“黑脚”症（见图3）。从料台取4尾未发病虾（见图4）、楼梯口处取8尾发病的虾（见图5），从所取12尾虾的肝胰腺中接种进行细菌分离培养，并取样品分别用95%酒精和波恩氏固定液固定做病毒检测和组织病理切片分析，同时取6尾死虾（见图6）用95%酒精固定做病毒检测。
       2月18日，共偷死100斤虾；
       2月19日，共偷死700斤虾；
       2月20日，抓虾。
       结果：在28℃经24小时培养，4尾未发病虾肝胰腺中未分离出细菌，8尾病虾其中5尾肝胰腺中分离出大量细菌（见图7），分离菌经16S rDNA测序比对初步鉴定为哈维氏弧菌；对采取的18尾虾样品用（RT-）PCR进行病毒检测，结果显示采取的18尾南美白对虾白斑症病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）、对虾杆状病毒（BP）、肝胰腺细小病毒（HPV）、虾肝肠胞虫（EHP）、桃拉病毒（TSV）、黄头病毒（YHV）、传染性肌肉坏死病毒（IMNV）、虹彩病毒（IV）均呈阴性；4尾未发病虾和8尾发病虾偷死野田村病毒（CMNV）均呈阳性，6尾死虾中有2尾偷死野田村病毒呈阳性（见图8），将阳性样品的PCR扩增产物进行测序比对，其序列与GenBank中偷死野田村病毒的同源性为99.5%。组织病理切片可见肝胰腺腺管萎缩、腺管间水肿（见图9），其它组织未见明显异常。
       分析：1、2016年11月，在福建地区高位池和水泥池养殖的南美白对虾出现了一种养殖户称为“黑脚偷死”的疾病，具有明显的传染性，严重的死亡率高达60%。2014年中科院黄海所科研人员通过研究，证实一种新型的野田村病毒是导致对虾偷死病的疑似病原，这种病毒被命名为对虾“偷死野田村病毒”。
       2、本病例中未发病虾和病虾都感染了偷死野田村病毒，部分病虾能分离出大量的细菌，本病例是否是由偷死野田村病毒感染或继发细菌感染引起的发病，尚需要进一步的流行病学调查和更多的案例来证实。（利洋水产研究所 雷燕 张文文 戚瑞荣 利洋西埔店 张强 提供 2017.03.09）

tangsl

由于缺乏偷死野田村病毒的特征性症状和流行病学资料做临床诊断参考，本病例虽然检出该病毒，但还不能确诊是由该病毒引起的疾病。就像一个癌症病人死亡前得了流感，体内检出流感病毒了，我们不能说这个人发病和死亡是流感病毒引起的。

tangsl

不论哪一种水产动物疾病，我们看重的是典型症状和特征性症状的描述，以及流行病学特征的资料，这是我们诊断疾病和控制疾病最重要的参考资料。但是我们现在看到的各种病害的资料主要是病原学研究，对指导临床应用实践意义不是很大。

leikunnuy

野田村病毒科Nodaviradae分为2个属，分别为主要感染昆虫的α野田村病毒属(Alphanodavirus)和主要感染鱼类的β野田村病毒属(Betanodavirus)。“偷死野田村病毒”属于野田村病毒科α野田村病毒属。

leikunnuy

偷死野田村病毒属于野田村病毒科α野田村病毒属，目前已知的两种虾类野田村病毒均不会引起发病对虾肝胰腺表现症状，因此将此病毒暂命名为“偷死病野田村病毒”。

leikunnuy

2014年，中国水产科学研究院黄海水产研究所科研人员通过组织病理学、人工感染实验、疑似病原基因进化分析、病毒分离纯化和荧光原位杂交等研究手段，证实一种新型的野田村病毒是导致对虾偷死病的疑似病原，这种病毒被命名为对虾“偷死野田村病毒（Covert mortality nodavirus，CMNV）”

leikunnuy

确实如1楼唐老师所说，目前我们只是从福建黑脚偷死的病虾中检测出来了这个偷死野田村病毒，但是这个病例中病虾也分离出大量的细菌，而且据养殖户反应，当时用药也用的比较杂，在发病前半个月该池塘要出现过缺氧，所以还很难确定这个病例是由于这个病毒引起的死亡。后期我们会继续跟踪调查这个病毒，调查其流行病学和危害程度。药店有出现这种症状或者是虾偷死的情况，可以联系研究所或自行采样寄送研究所进行检测。采样时注意记录水温、池塘资料、水质指标、养殖情况、发病情况，另外就是对所取的虾样进行拍照。

leikunnuy

目前，海南感城和广东江门都有反应虾偷死，偷死的虾有“黑脚”的情况，已经采集了样品送研究所，检测了之后，我们会公布检测结果。

lwr2012

找到致病原因，形成防治方案，最终看到效果，这样就 圆 .满了

Miss樷

实践出真知，概率就是不断的重复一样的事情，如果有大量数据或例子证明“黑脚”是偷死野田村病毒，就会很有说服力了，有可能是携带吗，环境恶化时，细菌引起发病，感觉原因很难说。

一滴水

leikunnuy 发表于 2017-3-9 14:56
目前，海南感城和广东江门都有反应虾偷死，偷死的虾有“黑脚”的情况，已经采集了样品送研究所，检测了之后 ...

1.8亩放50万虾苗，如此高的养殖密度似乎也给感染病毒病埋下了伏笔。该池塘发病后，周围邻近池塘受否也受到影响？

leikunnuy

lwr2012 发表于 2017-3-9 16:11
找到致病原因，形成防治方案，最终看到效果，这样就 圆 .满了

我觉得“偷死野田村病毒”可能是诱发因素，感染了这个病毒，虾自身抵抗力下降，然后感染细菌引起死亡的，黑脚也很有可能是细菌造成的。

leikunnuy

Miss樷 发表于 2017-3-9 17:03
实践出真知，概率就是不断的重复一样的事情，如果有大量数据或例子证明“黑脚”是偷死野田村病毒，就会很有 ...

后期我们会继续跟踪监测，目前我们从黑脚病料中检测出来了“偷死野田村病毒”，但是中科院黄婕和国家海洋局第三研究所的科研人员认为是“虹彩病毒”。所以还需要进一步跟踪调查检测。

leikunnuy

Miss樷 发表于 2017-3-9 17:03
实践出真知，概率就是不断的重复一样的事情，如果有大量数据或例子证明“黑脚”是偷死野田村病毒，就会很有 ...

这个病料我们当时也做了虹彩病毒的检测，但是可能参照的基因序列不同，有可能有病毒，我们的检测方法还不对，后面我们也会跟踪检测。

leikunnuy

一滴水 发表于 2017-3-10 09:06
1.8亩放50万虾苗，如此高的养殖密度似乎也给感染病毒病埋下了伏笔。该池塘发病后，周围邻近池塘受否也 ...

高位池，大部分都是这个养殖密度的。目前那边成虾不多了，都是才放的虾苗。去年11月份发病最厉害的时候，就是一个池塘接一个池塘发病，一个客户接一个客户发病的，具有明显的传染性。