[每周一例]金刚虾鳃部黑斑，分离出镰刀菌

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[病例774]福建漳州东山岛一高位池养殖金刚虾，面积1.3亩，水深1.5米，配有4台1.5kW水车式增氧机和7.5kW底氧。2024年6月9日放标粗好的虾苗约10万尾，10月中旬已搭冬棚（图1）。
       养殖到9月中旬，水温约30℃，开始出现偷死，约3-5斤/天，偷死虾无明显异常症状，检测水质较差，使用“碧水安”“速解安”调水后死亡量减少，但发现一到了蜕壳期死亡量就会增加。
       到10月初，平均规格约15尾/斤，每天偷死量达20-30斤，死亡以规格20-30尾/斤的中小虾为主，检查死虾鳃丝出现黑斑，从料罾查虾也发现鳃丝上有小黑点。外用1瓶“倍力灭”，使用“氟多力+菌炎好迪”各600g/亩，连用两天，之后4-5天死亡量降低至几斤。
       10月8日，偷死量又增加至20-30斤，用药同上，用后死亡量未减少；
       10月13日，再使用1瓶“倍力灭”“恩诺沙星+菌毒好迪”各600g/亩，仍然无效。
       10月16日，水温约27℃，偷死20-30斤，下午4点使用地笼抽虾，虾整体活力已经较差，检测水质指标，pH值8.0，氨氮1.0mg/L，亚硝酸盐0.25mg/L；取样7尾鳃部有黑斑的病虾，其中一尾虾一侧头胸甲已形成溃烂伤口，伤口边缘发黑；多数虾步足基部有黑斑（图2），剪开头胸甲，鳃丝发黄，部分有黑斑（图3），取黑斑处的鳃丝镜检，在40倍镜下可见分枝状菌丝及镰刀状孢子（图4）。
       分别接种7尾虾的鳃和肝胰腺组织于胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）进行细菌和真菌分离培养。经室温24h培养，7尾虾的鳃组织在细菌培养基（TSA）上长出较多细菌（图5）。经室温72h培养，7尾虾的鳃组织在真菌培养基（PDA）上长出大量黄色菌落，肝胰腺组织未长出优势菌落（图6），从真菌培养基（PDA）背面观察菌落中央呈淡黄色凸起，边缘为白色（图7），取菌涂片后在40倍镜下观察，可见透明状菌丝和镰刀状孢子（图8），送华中农业大学水产学院鱼类免疫与病害防控实验室，经18SrDNA测序初步鉴定为腐皮镰刀菌。
       取7尾虾的鳃、肝胰腺等组织保存于95%酒精和4%甲醛中用于病毒检测和组织病理切片观察。经公司研究所实验室普通PCR检测方法，对采集7尾虾的鳃、肝胰腺进行白斑综合征病毒（WSSV）检测，结果均呈阴性。组织病理切片结果显示：鳃组织水肿，细胞坏死，组织中及外周可见多量真菌菌丝体及分生孢子；步足基部肌肉的几丁质外壳处及外层肌肉可见大量真菌菌丝体及分生孢子，多量肌纤维严重变性，部分肌纤维增生、坏死（图9）；肝胰腺腺管萎缩、上皮细胞脱落；局部肠上皮细胞散在、脱落。
       10月17日，虾活力整体变差，决定清塘出虾。

       分析：1.镰刀菌主要感染金刚虾鳃部，在感染初期会在鳃丝上形成针尖状小黑点，之后逐渐形成黑斑，影响对虾呼吸和蜕壳，在蜕壳期会出现大量偷死。一般在初期不易发现，在出现黑斑后，3-5天时间偷死量可能快速增加至几百斤。
       2.金刚虾镰刀菌病主要发生在养殖中后期，平均规格达30尾/斤后，在养殖密度越高，发病率也越高。在低密度养殖区，发病主要集中在低温期，在高密度养殖区，在高温期也见大量发病。（利洋水产药店 西埔店 惠佳保 利洋公司 技术部 王林锁 徐保星 2025.03.20）

suotonghao

降低密度能否减少发病率？

小丑鱼

密度比较低的地方，普遍在低温期发病；北方工厂化养殖南美白对虾也有发病的，工厂化密度更大，发病基本不分季节。

小丑鱼

这个菌的典型特征是有镰刀状孢子，但镜检鳃丝的时候不一定都能看到孢子，更多时候看到的是大量菌丝，可使用真菌培养基分离一下。当然一般到感染后期虾体的症状也很明显。

利洋-戴荣贵

图8的镰刀状孢子图片拍得真不错，涨见识了