【技术分享】正确分离致病菌，准确指导水产用药

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正确分离致病菌，准确指导水产用药

区燕云

       目前引起水产动物感染发病的常见细菌有气单胞菌、链球菌、爱德华氏菌、诺卡氏菌、弧菌等。判断水产动物是否感染细菌发病，需要对发病的水产动物进行细菌分离培养，对分离的优势菌进一步鉴定从而判断致病菌种类。实际操作过程中，有些药店的技术人员因操作不当造成分离的细菌并非致病菌，导致药敏试验结果不准确，耽误治疗时机。因此，如何正确操作分离出病原菌及初步判断分离的细菌是否为致病菌对临床指导用药具有重要意义，需要引起重视。本文作者结合药店技术人员细菌分离操作过程中存在的常见问题作简要总结分析，并提出改进意见。
       一、辨别优势菌
       水产动物确定致病菌通常是对养殖动物内脏组织（肝、脾、肾、脑等）进行细菌分离培养、鉴定，以确保分离出较纯的致病菌。但实际操作过程中培养皿分离出的细菌并非都是病原菌，有些可能是操作过程中的污染菌。而只有在平板上分离出优势菌群才有可能是引起水产动物发病的病原菌，如何辨别平板上有无优势菌群，最直接简单的方法就是观察平板上有无大量形态一致的菌落。如下图所示培养皿，平板上大都是形态相同的菌落，即优势菌；有几个大小不一样的菌落一般认为是污染菌，可以忽略。优势菌群是对宿主发挥生理功能的菌群，决定着菌群对宿主的生理病理作用，致病菌鉴定及药敏试验选取优势菌落即可。

       二、细菌分离培养常见问题
       下面简要论述几种常见细菌分离培养存在的问题，如有以下几种情况建议重新分离细菌。
       1、培养皿分离的细菌杂，无明显优势菌群
       细菌分离时若平板上出现分离的细菌杂乱，大小不一、颜色参差不齐，找不出大量形态相近的优势菌群，这种情况一般是分离操作过程中受到污染所致。
       为防止此类现象需要注意：细菌分离接种动物为新鲜死亡或发病的活体，接种前用酒精棉擦拭解剖动物表面，减少污染；解剖后应尽快进行细菌分离，接种针要灼烧至铁丝发红再使用，并在酒精灯周围无菌环境进行平板划线。

       2、培养皿没有长出细菌
       怀疑有细菌病的养殖动物使用培养皿细菌分离培养后，平板只零星几个较大的污染菌落，无明显优势菌落。针对这种情况，可能有少数非常见致病菌无法在人工培养基上培养以外，主要是接种的部位未感染致病菌或分离过程中接种针没有充分冷却，烫死接种部位的致病菌。另外，分离细菌的动物近期服用过抗菌药物也可能造成发病动物无法分离出致病菌。
       建议分离细菌时需要接种多部位组织，减小误差；接种针灼烧后先触碰分离部位组织表面，一可杀死分离部位表面的细菌，二可冷却接种针后再接种细菌；采样做细菌分离时，先了解池塘用药情况，避开消毒、抗菌药等用药期内采样。

培养皿只零星几个污染菌落

       3、培养皿严重污染、长虫
       夏季高温天气，细菌培养皿在常温条件下超过3天可能出现长虫情况，需要寄回公司鉴定细菌的培养皿，需要注意接种时间，接种细菌的平板要严格封口膜密封或放置在4℃的冰箱中保存，预防长虫。

       4、细菌死亡
       弧菌在TCBS培养基上存活时间较为短暂，而在TSA培养基上存活时间稍长一些。所以需要鉴定弧菌种类时最好接种在TSA培养基上再邮寄。链球菌培养后常温下放置超过4天也可能会死亡，需要放置较长时间的细菌建议在接种第3天后重新接种到新的培养基上，防止细菌死亡。

培养皿细菌死亡

       5、不合理使用培养皿
       培养皿划分太多等份，接种细菌划线面积小，影响细菌培养效果，不利于判断优势菌。如为节约平板，建议分两等份或三等份即可。

培养皿划分多等份

（转自“利洋水产”微信平台）

无心贩鱼

有机会我也自己做做

小明

规范的操作才是理解认知，引导正确病理的第一步。

小丑鱼

主要是要准确分离出致病菌

素人渔夫

文章列出的是多数一线技术员常犯的问题，不规范操作会影响鉴定准确性

jiayanwuu

这个其实很实用，很多药店认为分离细菌，不管多少不管是否比较纯都认为是细菌感染。

利洋小七儿

浅显易懂

hanfj

规范的实验操作，才能得到正确的结果，才能合理知道用药。