[每周一例] 发病笋壳鱼分离出链球菌

利洋服务

[病例432]广东江门市荷塘六坊市场一笋壳鱼养殖池塘，面积4亩，水深1.5-2米，3台增氧机（图1）。2017年4月6日，放规格3cm/尾的笋壳鱼苗种4.5万尾，放苗时水温约22℃，投喂鲮鱼仔，早上喂一次，130斤/亩塘。
       2017年5月下旬开始发病，发病初期每天死亡3-30尾，后期每天死亡上百尾。发病鱼漂浮于池塘边的水面上、很少见“打转”，有的鱼体表有溃烂、稍显黄身、鳃丝糜烂。5月中旬池塘水亚硝盐偏高，简易测试盒检测0.35mg/L，发病前期用药比较乱，用杀孢子虫的药后死亡量增多，大换水后死亡量也增多。
6月份雨水多，死亡量增加。
       2017年7月14日现场采样，测定水温32℃，当天死亡200尾左右，发病鱼规格全长7-10cm。取发病的6尾笋壳鱼（图2、3），外观病鱼体表、鳃丝溃烂，稍显“黄身”，腹部充血（图4）；解剖肝脏颜色变淡、脾脏肿大（图5）。取每尾鱼的肝脏、脾脏接种营养琼脂培养基进行细菌分离培养，取发病鱼的肝、肾、脾、脑、肌肉等组织，分别用95%酒精和波恩氏液固定做病毒检测和组织病理切片观察。
       结果：在28℃经24小时培养，每个培养基上均长出乳白色、圆滑的菌落，16SrDNA分子鉴定为气单胞菌；其中“7-5肝脏”培养基上还长有针尖大小、乳白色菌落（图6），革兰氏染色为阳性、链状排列，16SrDNA分子鉴定为海豚链球菌（图7）。PCR检测虹彩病毒和神经坏死病毒均呈阴性。病理切片显示脾脏组织稀疏，轻微淤血（图8）；脑部局部轻微淤血、出血（图9）；肝脏脂肪变性（图10）；鳃部多量红染质团，鳃小片弯曲、散在细胞坏死（图11）。
       7月15日，当天死亡约200尾，开始用恩诺沙星、硫酸新霉素、盐酸多西环素拌冰鲜鱼内服，连续使用5天，死鱼数量逐渐减少。
       7月20日至8月10日，每天死鱼约30-40尾。
       8月10日之后，每天偶尔死鱼1-2尾。
       分析：1、本病例检测发病鱼虹彩病毒和神经坏死病毒呈阴性，发病鱼均有气单胞菌感染，发病后期连续使用抗菌药物后死亡量有所下降，死亡可能与感染细菌有关。其中一尾鱼肝脏中分离出链球菌，症状较其它鱼严重，可能是感染海豚链球菌加重病情。
       2、海豚链球菌能引起多种养殖鱼类脑膜炎和败血症死亡，笋壳鱼海豚链球菌病未见报道。海豚链球菌是非条件致病菌，侵袭能力较强，但据报道并非所有的都是致病株，存在不致病的共生菌株，本病例分离的海豚链球菌是否对笋壳鱼致病尚不能确定。（利洋公司研究所一室 胡芳源 戚瑞荣 席云清提供2017.10.19 ）

leikunnuy

18379341345 发表于 2017-10-21 20:27
还有一个疑问就是，确定了有这种菌，你怎么知道就是它致病的呢？有没有再次感染鱼体进行试验呢？如果真是 ...

病例的分析已经说了：“海豚链球菌是非条件致病菌，侵袭能力较强，但据报道并非所有的都是致病株，存在不致病的共生菌株，本病例分离的海豚链球菌是否对笋壳鱼致病尚不能确定。”目前只是分离到了这个细菌，还没有进行回归感染实验。

18379341345

leikunnuy 发表于 2017-10-21 19:51
病例提供的照片都是革兰氏的阳性球菌的，而且可以明显看出呈链状的，这个染色是蓝色的，可能是显微镜的转 ...

还有一个疑问就是，确定了有这种菌，你怎么知道就是它致病的呢？有没有再次感染鱼体进行试验呢？如果真是这种东西致病的使用控制它的药品就能药到病除了。

leikunnuy

18379341345 发表于 2017-10-20 23:38
如何判断是链球菌？我看染色有蓝色 也有红色的，有阳性菌也有阴性菌。

病例提供的照片都是革兰氏的阳性球菌的，而且可以明显看出呈链状的，这个染色是蓝色的，可能是显微镜的转换头的像素不够高，所以有点模糊，如果您看了染成红色的，就知道了。这个链球菌，不仅是通过革兰氏染色了，还通过了16S rDNA测序鉴定的。

18379341345

如何判断是链球菌？我看染色有蓝色 也有红色的，有阳性菌也有阴性菌。

晓问天涯

从5月下旬到8月上旬一直在死亡，过程中没有爆发性的死亡一次吗？

leikunnuy

鲈形目的黄鳍鲷和笋壳鱼都分离出来了海豚链球菌了，不知道这个海豚链球菌对其它鲈形目的鱼类有没有危害。记得当年还从草鱼上分离出来了链球菌，可惜了当时没有留下好的记录。