[每周一例] 南美白对虾“黑脚偷死”，检出偷死野田村病毒

利洋服务

[病例401] 福建省漳州市东山县西埔镇一南美白对虾养殖池塘，高位池，冬棚，面积1.8亩，平均水深1.6米，底部纳米管增氧（见图1），2016年11月13日一次性放苗50万尾，目前规格160尾/kg左右，每日三餐，两餐投喂饲料，一餐投喂冻丰年虫。
       2017年2月15日，在池塘的排污口处发现1尾死虾；
       2月16日，在排污口处发现80尾死虾，部分死虾呈现“黑脚”症；
       2月17日，在排污口处发现200尾死虾，下午3点40分到该养殖池塘调查，测定水温23.3℃，水质指标pH值8.0、氨氮0.4mg/L、亚硝酸盐0.4mg/L、溶解氧7.03mg/L，水中藻类以绿藻为主。在池塘的楼梯口处可见发病虾距水面5~10cm处游水（见图2），从池塘中部排污口处捞出大量偷死虾，偷死虾有三分之一呈“黑脚”症（见图3）。从料台取4尾未发病虾（见图4）、楼梯口处取8尾发病的虾（见图5），从所取12尾虾的肝胰腺中接种进行细菌分离培养，并取样品分别用95%酒精和波恩氏固定液固定做病毒检测和组织病理切片分析，同时取6尾死虾（见图6）用95%酒精固定做病毒检测。
       2月18日，共偷死100斤虾；
       2月19日，共偷死700斤虾；
       2月20日，抓虾。
       结果：在28℃经24小时培养，4尾未发病虾肝胰腺中未分离出细菌，8尾病虾其中5尾肝胰腺中分离出大量细菌（见图7），分离菌经16S rDNA测序比对初步鉴定为哈维氏弧菌；对采取的18尾虾样品用（RT-）PCR进行病毒检测，结果显示采取的18尾南美白对虾白斑症病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）、对虾杆状病毒（BP）、肝胰腺细小病毒（HPV）、虾肝肠胞虫（EHP）、桃拉病毒（TSV）、黄头病毒（YHV）、传染性肌肉坏死病毒（IMNV）、虹彩病毒（IV）均呈阴性；4尾未发病虾和8尾发病虾偷死野田村病毒（CMNV）均呈阳性，6尾死虾中有2尾偷死野田村病毒呈阳性（见图8），将阳性样品的PCR扩增产物进行测序比对，其序列与GenBank中偷死野田村病毒的同源性为99.5%。组织病理切片可见肝胰腺腺管萎缩、腺管间水肿（见图9），其它组织未见明显异常。
       分析：1、2016年11月，在福建地区高位池和水泥池养殖的南美白对虾出现了一种养殖户称为“黑脚偷死”的疾病，具有明显的传染性，严重的死亡率高达60%。2014年中科院黄海所科研人员通过研究，证实一种新型的野田村病毒是导致对虾偷死病的疑似病原，这种病毒被命名为对虾“偷死野田村病毒”。
       2、本病例中未发病虾和病虾都感染了偷死野田村病毒，部分病虾能分离出大量的细菌，本病例是否是由偷死野田村病毒感染或继发细菌感染引起的发病，尚需要进一步的流行病学调查和更多的案例来证实。（利洋水产研究所 雷燕 张文文 戚瑞荣 利洋西埔店 张强 提供 2017.03.09）

leikunnuy

w8210 发表于 2017-12-22 12:08
那样的话适当的混养部分鱼类，是不是可以切断感染途径？

比如我们这里，很多客户喜欢混养革胡子鲇，就 ...

有这样的说法，有的虾塘里面混养有大草鱼，也是用来吃发病的虾和死虾的，被鱼吃了之后，就不会直接被虾吃，这样切断传播途径来控制病毒病。

w8210

leikunnuy 发表于 2017-12-21 12:01
现在还没有发现垂直传播的情况，都是吃了丰年虫或者是死虾之后感染的。而且目前就福建和海南地区检出较多 ...

那样的话适当的混养部分鱼类，是不是可以切断感染途径？

比如我们这里，很多客户喜欢混养革胡子鲇，就是用来清理死亡的虾，减少虾吃虾的传染

leikunnuy

w8210 发表于 2017-12-20 22:53
是不是这些病毒的感染途径都是口服为主？病从口入？

现在还没有发现垂直传播的情况，都是吃了丰年虫或者是死虾之后感染的。而且目前就福建和海南地区检出较多，其它地区还没有发现，不用紧张。

w8210

leikunnuy 发表于 2017-12-13 20:06
黑脚都是死了之后的虾黑脚，而且呈现这种黑脚的情况也不是全部，只有三分之一的虾呈黑脚。因为是死了之后 ...

是不是这些病毒的感染途径都是口服为主？病从口入？

leikunnuy

w8210 发表于 2017-12-13 13:16
恩，意思就是黑脚黑腿还是环境引起的。

不知道这个野田春病毒会有什么症状？导致虾什么影响？

黑脚都是死了之后的虾黑脚，而且呈现这种黑脚的情况也不是全部，只有三分之一的虾呈黑脚。因为是死了之后出现的症状，所以应该不是疾病本身的症状。感染野田村病毒的虾症状是游水、红身，空肠空胃，现在来说，就福建那边发病严重，可以直接导致虾发病死亡，而且具有很强的传染性。

w8210

leikunnuy 发表于 2017-10-14 22:31
我们检测了黑脚的虾样，检测出来了野田村病毒，后来样品送黄海所也检测了，确实是有野田村病毒。9月份基因 ...

恩，意思就是黑脚黑腿还是环境引起的。

不知道这个野田春病毒会有什么症状？导致虾什么影响？

leikunnuy

我们检测了黑脚的虾样，检测出来了野田村病毒，后来样品送黄海所也检测了，确实是有野田村病毒。9月份基因库里面已经公布了红螯螯虾虹彩病毒的基因序列，我们也设计合成了检测引物，药店再有遇见黑脚的样品，可以给研究所溶氧检测。

leikunnuy

最近福建又出现黑脚症状的虾了。刚刚看海洋三局的研究报告说他们从黑脚症状的虾中检测到了红螯螯虾虹彩病毒，但是实验室做了攻毒实验，并没有多少虾呈黑脚，他们还是认为黑脚是跟环境有关。

leikunnuy

那片花海 发表于 2017-9-20 16:16
CMNV采用什么检测的呢？

在实验室用特异性检测引物进行RT-PCR检测。首先参照这个病毒的基因组序列，设计特异性的检测引物;再将病料处理，冻融使细胞破裂，然后抽题病毒的RNA（野田村病毒属于RNA病毒），将RNA反转录成cDNA，再进行PCR，PCR结束后电泳，看是否出现与引物设计相符合的目的条带，如果出现，将目的条带测序比对，如果是病毒的基因组序列，说明样品野田村病毒阳性，即样品感染了野田村病毒。

CMNV采用什么检测的呢？

leikunnuy

jiayanwuu 发表于 2017-8-18 17:22
α野田村病毒属感染昆虫后，昆虫表现出来的典型症状是什么？既然同属于一个属，表现出来的特征会不会有所联 ...

同一种病毒，感染不同的宿主，症状可能是不一样的，毕竟昆虫和对虾的亲缘关系是很远的。

leikunnuy

jiayanwuu 发表于 2017-8-18 17:22
α野田村病毒属感染昆虫后，昆虫表现出来的典型症状是什么？既然同属于一个属，表现出来的特征会不会有所联 ...

这个感染昆虫的情况我们没有做调查，可以查查看看有没有相关资料报道，由于我们不是研究昆虫的，所以我们不会去调查感染昆虫后的典型症状，我们的目标是调查感染了这个病毒的虾的典型症状。

leikunnuy

tangsl 发表于 2017-7-27 11:36
近期没有检出，可能是高温不适宜这个病毒繁殖。也可能没有流行起来，发病率很低。

我觉得跟高温不适宜这个病毒的繁殖有很大的关系的，去年发病厉害也就是11月份，水温在24℃左右，今年高温季节只是对药店寄送的样品进行了检测，11月份的时候要着重调查。

jiayanwuu

α野田村病毒属感染昆虫后，昆虫表现出来的典型症状是什么？既然同属于一个属，表现出来的特征会不会有所联系或者相似。