【技术分享】如何进行简易药敏试验

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如何进行简易药敏试验

雷燕

       近年来，随着水产养殖业的迅猛发展，细菌病的发病率和死亡率也不断增加。对于细菌病，主要使用抗生素进行治疗，因此，抗生素得到了大量广泛的应用，但是不规范使用抗生素（大量使用抗生素、乱用抗生素等）会导致细菌产生耐药性、降低水产动物免疫力、影响水产动物正常生长。在实际养殖生产过程中经常出现同一个养殖池塘第一次发生细菌病时用某种抗生素效果很好，但再次发病时使用抗生素无效的现象。如何解决这个问题将是水产技术工作者今后工作的重点。就目前来说，通过抗菌药物敏感性试验（药敏试验）选择敏感药物对细菌病进行预防和治疗是降低细菌病发病率和死亡率的有效手段。标准的药敏试验比较繁琐，对试验设备要求高，基层水产动物病害诊疗机构很难做到，现介绍一种简易药敏试验方法——纸片扩散法供大家参考。
       一、药敏试验所需工具
       试验需要酒精灯1个，接种棒（带接种针）1个，镊子1个，涂布棒1个，1mL滴管1个，生理盐水（或冷开水）1瓶，记号笔1支，尺子1把，培养皿（公司研究所一室制作提供）若干，药敏片（公司研究所一室制作提供）若干。

图1  简易药敏试验所需的工具

       二、准备细菌
       从发病水产动物体内组织分离的病原菌（不是污染菌）。
       三、准备药敏片
       用打孔机将吸水纸打成小圆片（直径约6mm），装入1.5mL离心管中，用高压灭菌锅灭菌备用。将适量药物放入小玻璃瓶中，用少量无菌蒸馏水溶解，吸取适量的药液加入离心管，将滤纸片完全浸湿，离心管壁写上药名，然后将离心管放入恒温箱（37℃）烘干备用。简易药敏试验所需药敏片由公司研究所一室制作发放。

图2  制作的药敏片

       四、标记培养皿
       做药敏试验之前，需要将药物的名称标记在培养皿的倒有培养基的一面上（不要标记在没有培养基的面上）。

图3  标记好的用于简易药敏试验的培养皿

       五、将病原菌接种至标记好的培养皿上
       点燃酒精灯，接种时在酒精灯火焰附近操作，避免污染。
       第一种方法： 将取的单个菌落，划线接种至已经标记好的药敏试验培养皿上，划线要密，可以重叠，直到划满整个培养皿为止。
       第二种方法： 用滴管取细菌培养液或冷开水，加入培养皿中，反复吹打，直到形成菌液（菌液不要太浓，反复吹打至无菌团）。取适量制备好的菌液，滴在标记的药敏试验培养皿上，用涂布棒均匀地涂满整个培养皿。（也可以用无菌的棉球，取菌液涂布培养皿）。
       六、贴药敏片
       先将镊子在酒精灯火焰上灼烧，冷却后取药敏片，将药敏片贴在培养皿上标记的相对应的药物名称标记位置。完全贴好药敏片后，将培养皿放在在合适的温度（25～30℃）范围内倒置培养。

图4  培养皿倒置培养

       七、观察记录结果
       培养12～16小时后，观察并用尺子记录抑菌圈的大小，抑菌圈直径＞30mm为极敏感，20～30mm为高敏感，15～19mm为中敏感，＜15mm为低敏感，0为不敏感。
       八、药物选择方法
       一般原则优先选择抑菌圈大的，内服吸收好的药物，其他作为备用药物。
       九、简易药敏试验注意事项
       1、进行药敏试验的须用病原菌，非病原菌或污染菌不用做药敏试验。
       2、进行简易药敏试验时在酒精灯火焰附近操作，避免污染。
       3、用镊子取药敏片时须待镊子冷却后取，取另外一种药物时须将取前一种药敏片时残留的药物灼烧掉之后再取。
       4、药敏试验结果（抑菌圈大小）与细菌的接种量，培养基的浓度、厚度、pH值等有关，在进行简易药敏试验时应尽量保持一致。

图5  药敏试验结果

       以上为大家介绍了一种简易药敏试验方法，可供基层水产动物病害诊疗机构进行药敏试验，根据药敏试验结果，指导进行科学、合理地用药，避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。养殖户朋友在进行养殖生产时需要进行药敏试验可联系当地利洋水产药店进行，或由当地利洋水产药店协助进行细菌分离，分离的细菌邮寄至研究所进行药敏试验。

（转自“利洋水产”微信平台）

利洋小七儿

很实用的分享，对现场操作很有用。

leikunnuy

简易的药敏试验在考虑到现场操作实际下进行的，虽然方法比较简单，但是对于养殖一线来说确实很实用，对于用药有一定的指导意义。

素人渔夫

精准用药，减少滥用

小丑鱼

帮助现场临床用药指导，很有作用