[每周一例]大黄鱼白鳃白肝，检出大黄鱼虹彩病毒

利洋服务

[病例713]浙江宁波市六横岛一网箱大黄鱼养殖基地，该养殖基地共13个养殖框（16式30通框），共计320个小框（框规格：5m×5m×10m）（图1），2023年5月中旬从福建宁德转运平均规格6两/尾的大黄鱼中苗（养殖1年零三个月）共计80万尾放养至该养殖基地，放养密度为5000尾/小框，投喂冰鲜，投饵率约7%，每天下午4点投喂1餐。5月末，该养殖基地水温上升至23℃，采样框（16通框）开始出现零星白鳃、死鱼情况，刚开始几尾，严重时每天死鱼40多尾。
       进入6月份，每天死鱼40尾左右，据“小飞碟”测定数据，当月水温22.5℃～23.2℃，溶解氧5.8mg/L～7.5mg/L（“小飞碟”安装在1.5m～2m水位）。
       6月19日，采样框发病加重，当天死鱼70多尾。
       6月20-25日均大潮，每天死鱼数量上升至100多尾。25日上午10点到该养殖基地调查，网箱中可见发病鱼在水面缓慢游动，“浮头”，或漂浮于水面，体表完好，体色偏白（图2）；取漂浮水面的病鱼检查鳃丝完好但发白，呈贫血状态（图3）；从网箱中取6尾慢游和漂浮的病鱼，外观病鱼体表完好，体色发白（图4）；解剖6尾病鱼鳃均发白，呈贫血状态；肝脏发白肿大（图5）；脾脏肿大发黑（图6）；肾脏肿大，剪开肾脏无血液，全是组织液样液体（图7）；脑组织无明显异常（图8）。分别取6尾病鱼（病鱼编号2-1～2-6）的鳃做寄生虫检查，从肝脏、肾脏和脑中接种加10%胎牛血清的脑心浸液琼脂（BHIA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织用4%的甲醛固定做组织病理切片观察；取5尾病鱼（病鱼编号2-1～2-5）的鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织用95%酒精固定做病毒检测。
       同时从临近未发病网箱取4尾鱼，其中2尾鳃发白（鱼编号3-1，3-2），2尾鳃正常（鱼编号4-1，4-2），解剖见肝脏肿大、轻微发白，其它组织器官无明显异常。分别取4尾鱼的鳃做寄生虫检查，从肝脏、肾脏和脑中接种加10%胎牛血清的脑心浸液琼脂（BHIA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏和脑组织分别用95%酒精和4%的甲醛固定带回公司研究所一室做病毒检测和组织病理切片观察。
       结果：镜检所取10尾鱼的鳃均未发现寄生虫感染。接种的加10%胎牛血清的BHIA培养皿分别经28℃和37℃培养36h，所采取的10尾鱼中仅1尾鱼（未发病网箱鳃发白的鱼，编号3-1）的肝脏和肾脏中分离出少量假单胞菌，其它鱼的肝脏、肾脏和脑中均未分离出病原菌（图9、图10、图11）。采用实验室普通PCR检测方法，对采集鱼的鳃和内脏组织（肝脏、脾脏和肾脏）进行真鲷虹彩病毒（RSIV）检测，结果均为阴性（图12）；采用实验室普通RT-PCR检测方法，对采集鱼的脑组织进行神经坏死病毒（VNNV）检测，结果均为阴性（图13）；采用实验室普通PCR检测方法，对采集鱼的鳃和内脏组织（肝脏、脾脏和肾脏）进行大黄鱼虹彩病毒（LYCIV）检测，结果鳃发白的病鱼（编号2-1～2-5）均为阳性，正常网箱鳃发白的鱼（编号3-1，3-2）呈阳性，正常网箱鳃正常的鱼（编号4-1，4-2）呈阴性（图14）；采用实验室荧光定量PCR检测方法进行大黄鱼虹彩病毒检测，2-1号鱼Ct值为17.49；2-2号鱼Ct值为26.84；2-3号鱼Ct值27.82；为2-4号鱼Ct值27.96；为2-5号鱼Ct值为28.03；3-1号鱼Ct值为28.50；3-2号鱼Ct值为28.44；4-1号鱼Ct值为31.44，4-1号鱼Ct值为31.28（图15），均呈阳性，但鳃发白越严重的病鱼，Ct值越低，组织中病毒粒子含量越高。
       组织病理切片结果显示病鱼肝脏轻度脂肪变性、水样变性，少量细胞散在坏死，少量色素沉积；脾脏细胞弥散坏死，组织轻度淤血，可见数个结节性坏死灶，大量色素沉积，较多黑色素巨噬细胞中心；肾脏数个结节性坏死灶，局部轻微淤血，少量细胞散在坏死，少量色素沉积，少量黑色素巨噬细胞中心；鳃组织坏死严重，上皮细胞弥散坏死、脱落严重，鳃丝间多量脱落、坏死细胞，鳃小片弯曲；脑组织未见明显异常（图16）。正常养殖框的鱼也有不同程度的病变，但病变较轻。
       6月26日，采样框死鱼上升至400尾。
       6月27-29日，停料，每天死鱼300多尾。
       7月6日，回访，近期该养殖基地养殖的大黄鱼损耗严重，除采样框白鳃死亡严重以外，其它养殖框大黄鱼也陆续出现白鳃死亡，目前放养的13个养殖框均有大黄鱼白鳃死亡。

       分析：1、大黄鱼是福建省养殖最多的海水鱼类，主要采取普通网箱养殖和深海网箱养殖两种养殖模式，近年来，高温期被养殖户称之为“白鳃病”的危害日益严重，幼鱼到成鱼均可发病，病死率约30%，严重者可达70%。
       2、本病例流行病学调查发现大黄鱼“白鳃病”具有传染性，其发病症状与何爱华（1999），陈新华（2005）等报道的大黄鱼虹彩病毒症状一致，实验室通过普通PCR和荧光定量PCR两种检测方法结果显示患“白鳃病”的大黄鱼均呈阳性，且白鳃越严重的病鱼组织扩增条带越亮、Ct值越小，病毒粒子含量越高，证实“白鳃病”与大黄鱼虹彩病毒（Large yellow croaker iridovirus，LYCIV）感染有关。（利洋公司研究所一室 雷燕 区燕云 张会军 肖冬娇 利洋水产药店 城澳店 陈世豪 邓志强 提供 2023.10.12）

tangsl

大黄鱼虹彩病毒（Large yellow croaker iridovirus，LYCIV），也是细胞肿大属的虹彩病毒，以前用真鲷虹彩病毒的引物做PCR检测不出来，真鲷虹彩病毒也能造成白鳃白肝。

hanfj

“白鳃白肝”，可能是因为病毒破坏了脾肾的等造血器官，导致贫血发白

tangsl

hanfj 发表于 2023-12-21 14:55
“白鳃白肝”，可能是因为病毒破坏了脾肾的等造血器官，导致贫血发白

有报道病毒可以破坏大黄鱼内脏组织的结构与功能，特别是使脾脏组织等造血器官，造成内脏组织中的血细胞发生严重退行性变化，从而导致全身血管内的血细胞特别是红细胞稀少，使患病鱼在临床上表现出极度贫血状态。

tangsl

早期有人研究认为真鲷虹彩病毒(red sea bream iridoviral virus, RSIV)是导致“白鳃病”的主要病原；也有人运用细胞培养和组织超薄切片电镜观察认为一种RNA病毒颗粒可能是引起“白鳃病”的病原。2017年浙江海洋所报道患“白鳃病”病样组织电镜显微观察到的是直径约45~50 nm，无囊膜的病毒颗粒，为虹彩病毒。与真鲷虹彩病毒不同，真鲷虹彩病毒（RSIV）（细胞肿大属）电镜下观察是一种直径约为150~180 nm有囊膜的病毒颗粒。

tangsl

2022年浙江海洋所（上帖研究人员）和福建农林报道（外文）根据电镜观察结果，细胞质中有大量的病毒颗粒。病毒颗粒直径为150-200 nm，具有电子致密核心。将这种新型病毒命名为大黄鱼虹彩病毒Larimichthys crocea Iridovirus（LYCIV）。并得到国际病毒分类委员会的确认，该病毒分属虹彩病毒科，细胞肿大虹彩病毒属的成员，这样这个病的原因就算明确了，病名病原都确定了。

利洋-戴荣贵

“采用实验室荧光定量PCR检测方法进行大黄鱼虹彩病毒检测，2-1号鱼Ct值为17.49；2-2号鱼Ct值为26.84；2-3号鱼Ct值27.82；为2-4号鱼Ct值27.96；为2-5号鱼Ct值为28.03；3-1号鱼Ct值为28.50；3-2号鱼Ct值为28.44；4-1号鱼Ct值为31.44，4-1号鱼Ct值为31.28（图15），均呈阳性，但鳃发白越严重的病鱼，Ct值越低，组织中病毒粒子含量越高”。Ct值是RT-PCR结果的最终数据，但RT-PCR数据的可信度应该附上溶解曲线，如果溶解曲线峰值单一，才能证明该数据可信。其次，在学校学习时，老师曾说过，如果Ct数值超过25以上可信度就不高了。这是一篇有关检测很详细的报道，如果有条件的话还可以附上虹彩病毒的组织半定量或者荧光定量的结果，这样就能进一步了解清楚该病毒具体在哪一个组织中大量富集。

tangsl

利洋-戴荣贵 发表于 2024-10-26 20:59
“采用实验室荧光定量PCR检测方法进行大黄鱼虹彩病毒检测，2-1号鱼Ct值为17.49；2-2号鱼Ct值为26.84；2-3号 ...

确实还是定量检测准确一些。有时候定性检测，即使阳性也不太好分析是不是这个病原引起的发病，或病原在病例中起的作用，还得从症状和流行上分析、验证。

利洋陈世豪

大黄鱼白鳃白肝病是行业难题，马老师提出的该病是隔年跨年病目前看很准确，未来可能要从这个角度跟踪。