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标题: [每周一例]病毒性神经坏死病毒继发感染哈维氏弧菌引起青斑黑身、趴底死亡 [打印本页]

作者: 利洋服务 时间: 2014-7-3 11:02
标题: [每周一例]病毒性神经坏死病毒继发感染哈维氏弧菌引起青斑黑身、趴底死亡
[病例290] 海南省文昌市会文镇一室内青斑育苗水泥池，循环水养殖（见图1），2014年4月28日放苗2万尾，5月2日开始出现涨肚子、黑身、趴底死亡，用过一些营养保健药物，效果不十分明显。到5月9日，池中还剩下约3000~4000尾鱼苗。
   2014年5月9日上午11点到现场，可见池底有大量黑身的鱼，趴底，活力差（见图2），测定水温28℃。从池中取出2尾鱼，一尾外观正常的鱼，一尾呈“黑身”的鱼（见图3）。将取的两尾鱼剪断尾巴，从血液中接种进行细菌分离培养，并将整尾鱼用95%酒精浸泡做病毒检测。
   结果：两尾鱼均能检测出病毒性神经坏死病毒，且病毒粒子含量高（见图4）。正常鱼的血液中未分离出细菌，黑身鱼的血液中分离出大量的细菌（见图5），经过16S rDNA测序鉴定，该分离菌为哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）。
   分析：1、近年石斑鱼育苗过程中由病毒性神经坏死病毒引起的“黑身”、“趴底”，死亡发病率非常高，危害也很大，严重者一夜之间死亡率达100%，该病毒主要危害幼鱼和仔鱼，对成鱼危害不大。发病后常常继发细菌感染，加重死亡。
   2、病毒性神经坏死病毒病主要通过亲鱼垂直传播，鱼卵的带毒率高，目前该病没有有效治疗方法，通过提前处理水质，育苗过程中保持环境稳定，减少发病的诱发因素，可以减少该病的发生和降低死亡率。（利洋研究所雷燕王惠儒会文店程宁提供 2014.07.03）

作者: tangsl 时间: 2014-7-3 11:32
大家一致的看法，南方海水鱼的弧菌还是以哈维氏弧菌为主。链球菌、爱德华菌也不少。

作者: tangsl 时间: 2014-7-3 11:35
就做2尾鱼细菌分离培养少了一点，是不是细菌感染以后都黑身了？没黑身的鱼体内病毒也不少。

作者: 老头苗 时间: 2014-7-4 10:45
本帖最后由老头苗于 2014-7-4 11:50 编辑

5月初烟堆和冯家湾这次斑苗大面积的死亡，很值得商榷，并不是简单的神经坏死病毒或弧菌感染，这次病害发生在大雨后的一两天，主要是黑身爬底，接着大量死亡，几天内很多场不管大小苗的青斑和珍珠都损失超过5成，没爬底的也呈一定消瘦，大约5月10-15号左右才普遍稳定，我去采样的时候是20号，调查了7-8个场，这个时候黑身爬底的已经很少了，但也采了发病后两个场的几条青斑和珍珠，听几个场主介绍，这次病害的黑身与神经坏死病毒病的症状完全不同，几乎没见在水面侧卧“飘”的，而且大小苗都同时发病。
差不多在5月初的同一时间，也是那场大雨过后，西线的崖城几个场小珍珠也是这个黑身爬底症状，死亡超过8成，一个场的技术员当时用手机拍下病鱼的肠道照片，可见明显典型的微孢子的包囊，这个场我5月15号去的时候，还有不少苗爬底，解剖确诊是微孢子虫感染。
5月20号从烟堆采样的几条黑身爬底鱼，已经是离发病时候10多天了，肠道涂片是没有发现明显的微孢子虫，但肠上皮细胞核呈严重溶解状，有的核中有大的包涵体，但内脏并没有明显的细菌，至于神经坏死病毒，这两天正在检测。20号在烟堆从另外几个场检测到青斑和小珍珠，甚至小虎斑的肠道典型微孢子虫病。
发病高峰期时，很遗憾我当时没有得到信息，没有采到典型的病鱼，但从后期调查看，这次大雨后的大范围的流行死亡不太可能是神经坏死病毒病，更不可能是弧菌感染，微孢子虫病的急性发作应值得怀疑，从今年检测的多起车间斑苗病例看，以前微孢子虫病有明显瘦身，但今年几个场瘦身症状并不明显，就只是黑身爬底。这次病情值得注意的就是流行于5月初那两天暴雨后，渗透压变化是微孢子虫萌发的必要条件，烟堆那一片本来就是这个虫的重灾区，如果显微镜保养不好，或者不是经常看肠道压片，没有一定经验，是很难辨别肠道中的微孢子虫，这个虫与肠上皮细胞中的颗粒或白便颗粒非常像。

好像这论坛只能上传网络照片？一些微孢子虫的染色照片可参看水产频道中利洋专区同一个主题下的讨论

作者: 老头苗 时间: 2014-7-4 11:24
对石斑鱼肠道微孢子虫病的诊断最好是用肠内容物涂片染色，怎么传不上照片？只有网络图片可以上传？看微孢子虫染色照片可以上水产频道这个主题下的
病毒性神经坏死病毒继发感染哈维氏弧菌引起青斑黑身、趴底死亡一例
http://www.******st.cn/thread-30288-1-1.html

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:08

老头苗发表于 2014-7-4 11:24
对石斑鱼肠道微孢子虫病的诊断最好是用肠内容物涂片染色，怎么传不上照片？只有网络图片可以上传？看微孢子 ...

徐老师，每周一例这个栏目比较特殊，网络管理员设置了权限，只有版主“利洋服务”一个人可以发主题帖，但是大家可以上传照片。
微孢子虫一直没有机会在现场检查到，我们在虾上照的照片也多数不清晰，可能是因为太小的缘故，没有经验也很难认识。但在网络上多次看到你的照片。这个虫确实危害很大，肠道有虫，不吃食，会瘦身。在石斑鱼上药店还的加强镜检。

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:18
我把徐老师的肠道微孢子虫图片发上来，大家看一看，和肠道的粘液细胞感觉没有大的区别。

112838kt9ww39x6xnw49dn.jpg (259.54 KB, 下载次数: 365)

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:21
继续
肠上皮细胞核被感染微孢子

1.jpg (258.42 KB, 下载次数: 331)

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:22
继续
核由于感染微孢子虫而肿大

2.jpg (233.8 KB, 下载次数: 372)

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:23
继续
微孢子虫非典型阶段

3.jpg (474.81 KB, 下载次数: 356)

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:24
继续
微孢子虫典型肠道症状镜检照片

4.jpg (408.43 KB, 下载次数: 372)

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 16:25
继续

微孢子虫在肠道上皮细胞核中发育

5.jpg (247.76 KB, 下载次数: 388)

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-5 16:35
我们从白便的石斑鱼肠道中检测出来过一次，仅检测出来过一次，就是这次去海南的样本。

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-5 16:42
通过PCR检测出来过一次的，下周一把上次采集的样品拿出来，再检测一次。

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 17:02

leikunnuy 发表于 2014-7-5 16:42
通过PCR检测出来过一次的，下周一把上次采集的样品拿出来，再检测一次。

是用孢子虫的基因序列做引物，还是微孢子虫的基因序列做引物？二者还是有很大的区别的，随着人们对二者生物学特征认识的深入，现在一般将二者各自单独分离开来，目前的孢子虫大类中不包括了微孢子虫。

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-5 20:51

tangsl 发表于 2014-7-5 17:02
是用孢子虫的基因序列做引物，还是微孢子虫的基因序列做引物？二者还是有很大的区别的，随着人们对二者生 ...

是用检测鲫鱼孢子虫的检测引物，当时只是跑出来了条带，没有测序。

作者: tangsl 时间: 2014-7-5 20:55

leikunnuy 发表于 2014-7-5 20:51
是用检测鲫鱼孢子虫的检测引物，当时只是跑出来了条带，没有测序。

难说了。

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-5 20:56

tangsl 发表于 2014-7-5 20:55
难说了。

确实，所以要重新做啊，还必须要测序啊，跑出条带来了，说明不了问题的，必须要测序的。反正再检测看看吧！

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