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标题: 生鱼弹状病毒！ [打印本页]

作者: leikunnuy 时间: 2014-4-28 13:39
标题: 生鱼弹状病毒！
本帖最后由 leikunnuy 于 2014-4-28 14:13 编辑

2014年4月1日，收到勒流店邮寄3尾生鱼的共计9份样品（肝、脾、肾），通过特异性的检测引物，利用RT-PCR检测方法，从病料中扩增出与预期片段大小相符的目的条带（380bp），将目的条带测序，并将结果输入NCBI BLAST比对，其序列与GenBank中Siniperca Chuatsi rhabdovirus（SCRV）基因序列的同源性为95.6%，证实此次送检生鱼病料中弹状病毒为阳性。
电话回访勒流店送检人员，当时发病情况为：突然高温后开始发病，一个塘接着一个塘发病，死亡高峰时每天死亡几百斤，外观病鱼体表无症状，烂鳃，鳃上附着泥，解剖见鳔出血。

检测结果.jpg (139.75 KB, 下载次数: 218)

作者: leikunnuy 时间: 2014-4-28 13:53
本帖最后由 leikunnuy 于 2014-4-28 14:20 编辑

   去年在勒流店调查生鱼疾病时，就感觉生鱼不仅仅是诺卡氏菌或舒伯特气单胞菌那么简单，回来之后查阅了资料，发现珠江所报道了生鱼弹状病毒病（CHRV）。但是在GenBank中没有查到起相关的基因序列，无法建立PCR检测方法，后来查文献知道其与鳜鱼弹状病毒(SCRV)的基因同源性较高，就在GenBank中检索下载了SCRV的基因序列，设计并合成了检测引物，准备调查弹状病毒。
   4月1日收到勒流店3尾生鱼的病料，就抽提了DNA，PCR检测了弹状病毒，但是结果为阴性，当时没有太在意，认为可能是本身病料中就没有病毒，还有就是引物可能存在问题。
   前几天，准备再次合成检测引物，下载了几篇文章看了一下，一看，发现了一个大问题，弹状病毒是RNA病毒，不是DNA病毒，所以开始的检测是不准确的。因此又将4月1日勒流店的病料找出，抽提RNA，RT-PCR检测，检测结果如上所示。

作者: leikunnuy 时间: 2014-4-28 15:54
各药店负责的市场有生鱼养殖的，有发病的情况的，现在研究所可以为大家检测生鱼弹状病毒，欢迎各药店采样（病鱼的肝、脾、肾）送检，如果有条件，记录一下发病历程，并拍一些照片给我们。

作者: tangsl 时间: 2014-4-28 16:02
有没有病鱼照片？有没有发病特点（流行规律）？过几天去鲁桥店讲课参考。
找一个资料全的发病过程记录详细的，写一个病例。

作者: leikunnuy 时间: 2014-4-28 16:14

tangsl 发表于 2014-4-28 16:02
有没有病鱼照片？有没有发病特点（流行规律）？过几天去鲁桥店讲课参考。
找一个资料全的发病过程记录详细 ...

没有，什么都没有，只还有病料，周三开会，开完会，周四我就去勒流店采样，去勒流店、杏坛店、三水店采样去，就是想去拍一些照片，希望能赶在你讲课之前把这些东西搞出来，我会尽快的。

作者: tangsl 时间: 2014-4-28 18:02
生鱼的弹状病毒病前年就说珠三角有流行，到目前也没见到有这方面临床危害的正式报道，临床症状、流行水温、鱼龄等情况还不了解，发病率有多高，危害有多大，还不了解，有生鱼养殖的药店不少，大家还要了解清楚，研究所会配合。

作者: leikunnuy 时间: 2014-4-29 08:05
除了生鱼，还有桂花鱼和牙鲆的弹状病毒，基因组都差不多，有需要检测的，也可以送样给我们，我们会检测，后面也会跟踪调查。

作者: 杜德群 时间: 2014-4-30 23:20
好的！

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-1 22:05

杜德群发表于 2014-4-30 23:20
好的！

杜哥，这事还得你大力支持啊，有请杜哥详细讲解珠三角生鱼养殖及疾病情况，病毒病的可能性大不大？发病率有多高，危害有多大？都是在什么时候发病的？

作者: 杜德群 时间: 2014-5-8 21:04
任务艰巨，大家共同努力！

作者: tangsl 时间: 2014-5-8 21:13

杜德群发表于 2014-5-8 21:04
任务艰巨，大家共同努力！

在珠三角到高温期还有没有啊？今天在微山跑堂，客户都说高温期黑鱼肝脏肿大、出血，没有药物可治，死亡量巨大，不知道是不是这个病。
按常理，弹状病毒在30度以上的高温期，不会大量发生。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-8 22:03

tangsl 发表于 2014-5-8 21:13
在珠三角到高温期还有没有啊？今天在微山跑堂，客户都说高温期黑鱼肝脏肿大、出血，没有药物可治，死亡量 ...

唐老师，黑鱼是什么鱼？我看资料这个病毒可以感染生鱼、桂花鱼、牙鲆（资料看的少，可能不全面）。

作者: tangsl 时间: 2014-5-8 22:21
黑鱼=乌鳢，我遇到的这里养殖的都是纯种乌鳢。生鱼=杂交乌鳢，简称杂交鳢。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-8 22:24

tangsl 发表于 2014-5-8 22:21
黑鱼=乌鳢，我遇到的这里养殖的都是纯种乌鳢。生鱼=杂交乌鳢，简称杂交鳢。

生鱼、财鱼、杂交鳢、乌鳢，现在又多出一个黑鱼了......头大！

作者: 杜德群 时间: 2014-5-13 23:08
一个物种，不同区域。或纯种，或杂交。广东地区父本为山东种或湖南种，母本为本地种。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-14 08:49

杜德群发表于 2014-5-13 23:08
一个物种，不同区域。或纯种，或杂交。广东地区父本为山东种或湖南种，母本为本地种。

还有如何杂交的？名字如何？一起来吧！方便记住。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-29 17:37
2014年5月28日收到山东鲁桥店3份黑鱼（生鱼）样品，其中两份为小生鱼，另外一份为大生鱼（规格约1.5斤/尾），经过RT-PCR检测，大生鱼弹状病毒呈阳性，小生鱼呈阴性。图为检测结果。

鲁桥检测结果.jpg (81.75 KB, 下载次数: 252)

作者: 老头苗 时间: 2014-5-29 18:42
珠三角的生鱼和加州鲈及鳜鱼的弹状病毒是一个东东，这几年在佛山很流行，加州鲈主要危害苗期，生鱼为成鱼期，但今年也开始在生鱼苗期检测到。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-29 19:39

老头苗发表于 2014-5-29 18:42
珠三角的生鱼和加州鲈及鳜鱼的弹状病毒是一个东东，这几年在佛山很流行，加州鲈主要危害苗期，生鱼为成鱼期 ...

感谢你提供这样的信息。我们从生鱼和桂花鱼中检测出来了，加州鲈鱼还未检测到，后面我们会加强检测。

作者: tangsl 时间: 2014-5-29 20:04

leikunnuy 发表于 2014-5-29 17:37
2014年5月28日收到山东鲁桥店3份黑鱼（生鱼）样品，其中两份为小生鱼，另外一份为大生鱼（规格约1.5斤/尾） ...

本月中旬去鲁桥讲课，养殖户就说6、7月份有一个“肝肿大”病，没有药可治，死亡很严重，养殖户谈虎色变，当时给杜德群打电话，就怀疑是这个病毒病。

作者: tangsl 时间: 2014-5-29 20:06

老头苗发表于 2014-5-29 18:42
珠三角的生鱼和加州鲈及鳜鱼的弹状病毒是一个东东，这几年在佛山很流行，加州鲈主要危害苗期，生鱼为成鱼期 ...

生鱼的弹状病毒的致病性应该是无疑的了！不知道加州鲈的苗期是什么症状，是不是这个弹状病毒引起的。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-29 21:14

tangsl 发表于 2014-5-29 20:04
本月中旬去鲁桥讲课，养殖户就说6、7月份有一个“肝肿大”病，没有药可治，死亡很严重，养殖户谈虎色变， ...

小苗检测不出来啊，无论广东的，还是山东的，小苗都检测不出来，检测出来的都是成鱼（1.5斤/尾以上），检出率还是挺高的。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-29 21:15

tangsl 发表于 2014-5-29 20:06
生鱼的弹状病毒的致病性应该是无疑的了！不知道加州鲈的苗期是什么症状，是不是这个弹状病毒引起的。

前一段时间勒流店店长以及总店长都在反应，加州鲈鱼苗损失挺大的，可惜当时没有采样啊，不知道是不是这个病毒引起的。

作者: 老头苗 时间: 2014-5-30 09:10

leikunnuy 发表于 2014-5-29 21:15
前一段时间勒流店店长以及总店长都在反应，加州鲈鱼苗损失挺大的，可惜当时没有采样啊，不知道是不是这个 ...

加州鲈小苗的时候水面窜和螺旋状下沉死亡，佛山这几年死亡很严重，珠江所刚发表了论文，我们也用发病的小苗上细胞培养出了病毒，今年江浙一带从广东进的加州鲈苗也一样发病严重。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-30 09:15

老头苗发表于 2014-5-30 09:10
加州鲈小苗的时候水面窜和螺旋状下沉死亡，佛山这几年死亡很严重，珠江所刚发表了论文，我们也用发病的小 ...

你们能做细胞培养？实验条件很好的哦！能不能留个联系方式啊，向您请教一些问题。

作者: abbe520 时间: 2014-5-30 10:43

leikunnuy 发表于 2014-4-28 13:53
去年在勒流店调查生鱼疾病时，就感觉生鱼不仅仅是诺卡氏菌或舒伯特气单胞菌那么简单，回来之后查阅了 ...

求教一下，1号到20多号，那么多天了，病料RNA降解得多厉害，结果能准确吗？

作者: abbe520 时间: 2014-5-30 10:46

leikunnuy 发表于 2014-5-8 22:24
生鱼、财鱼、杂交鳢、乌鳢，现在又多出一个黑鱼了......头大！

这条鱼的名字很多的，粤西叫木鱼，四川叫乌棒。你没研究一条鱼的时候当然觉得头大，当你天天都关注他的时候，那都不是事儿。

作者: leikunnuy 时间: 2014-5-30 16:51

abbe520 发表于 2014-5-30 10:43
求教一下，1号到20多号，那么多天了，病料RNA降解得多厉害，结果能准确吗？

我们的病料是用95%酒精浸泡处理的，这样处理了的病料，3个月内都能检测出病毒。酒精能使RNA酶失活，没有了RNA酶，RNA降解不了那么快的。

作者: rongju111 时间: 2014-5-30 22:33
杂交鳢=乌鳢（父本）x 斑鳢（母本）

作者: leikunnuy 时间: 2014-6-5 19:04
本帖最后由 leikunnuy 于 2014-6-5 19:11 编辑

2014年6月4日收到伦教店送2份样品（1份加州鲈鱼3尾，1份生鱼4尾）弹状病毒检测结果。弹状病毒RT-PCR检测，目的片段长372bp。

伦教店送的病料（鱼已经经过酒精浸泡）.jpg (248.84 KB, 下载次数: 281)

伦教店送的病料的弹状病毒的检测结果.jpg (137.16 KB, 下载次数: 272)

作者: leikunnuy 时间: 2014-6-5 19:10
听伦教店张店长说，这个塘的加州鲈鱼死亡量很大的，一天死10000尾，现在塘中所剩无几。送病料之前，张店长特别联系了我，说加州鲈鱼发病了，他做了细菌分离，想请研究所做一些细菌鉴定和药敏实验，当时我想前几天“老头苗”说佛山加州鲈鱼苗种弹状病毒很严重，于是就让张店长采样检测病毒，检测了，果然有啊！

作者: leikunnuy 时间: 2014-6-11 17:28
2014年6月9日收到鲁桥店1份草鱼样品和1份生鱼样品（1尾2cm的小生鱼苗），经过检测，生鱼弹状病毒呈阳性。

鲁桥生鱼样品检测结果.jpg (106.8 KB, 下载次数: 303)

作者: leikunnuy 时间: 2014-6-11 17:29
弹状病毒在生鱼上这是第一次从小苗上检测出来，之前都是从生鱼成鱼上检测出来。看来弹状病毒在生鱼小苗上也可以发病，且有可能是亲本垂直传播。
为了确定，联系了店长，店长答应再去这个塘，采几尾发病的生鱼，再检测确认一下。

作者: leikunnuy 时间: 2014-6-11 17:32
询问症状：生鱼烂鳃，身上有指环虫，规格2cm，死亡量大，放苗10多天，塘中所剩无几。

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-28 10:52
最近几天，三水店邮寄了几批桂花鱼的样品，要求我们检测ISKNV（传染性脾肾坏死病毒），经过检测，全部是阴性的，我们就又检测了SCRV，总共是7份样品，经检测，其中5份SCRV呈阳性，阳性目的条带我们送出去测序，经比对，目的片段为SCRV的基因片段。

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-28 10:59
下面这两个图就是比对结果。Hybrid snakehead virus是杂交鳢弹状病毒，Siniperca chuatsi rhabdovirus是鳜鱼弹状病毒，Monopterus albus rhabdovirus是黄鳝弹状病毒。

测序比对结果.jpg (37.17 KB, 下载次数: 295)

特写.jpg (16.95 KB, 下载次数: 275)

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-28 11:01
黄鳝弹状病毒是中国科学院水生生物研究所公布的。

文章.jpg (279.9 KB, 下载次数: 277)

作者: leikunnuy 时间: 2014-7-28 11:02
也就是说，我们建立的检测方法，还可以对黄鳝的弹状病毒进行检测，欢迎药店送检黄鳝病料。

作者: leikunnuy 时间: 2016-6-26 17:06
弹状病毒，记得当年我们从湖北那边，当时是周辉送检的黄鳝里面也检测到一例弹状病毒的，之前水生所的报道过这个病毒。

作者: leikunnuy 时间: 2019-3-2 21:06
加州鲈鱼的弹状病毒又开始流行了，目前珠三角很多苗塘加州鲈鱼发病，检测弹状病毒呈阳性，提醒大家注意防控，以免后期暴发病毒病导致大量死亡。

作者: tangsl 时间: 2019-3-4 11:48
生鱼苗的“螺旋打转”很厉害，死亡严重；大规格一点的也有打转症状，但更主要的是“肝肿大”。

作者: leikunnuy 时间: 2019-3-4 17:41

tangsl 发表于 2019-3-4 11:48
生鱼苗的“螺旋打转”很厉害，死亡严重；大规格一点的也有打转症状，但更主要的是“肝肿大”。

这种情况在早几年就见过了，但是生鱼苗很少检测出弹状病毒的，生鱼都是成鱼检测出来弹状病毒的。生育苗“螺旋打转”可能还是跟气泡病有关，以前听说往池塘中加盐就可以缓解。

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