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标题: 如何看样品病毒检测报告电泳图? [打印本页]

作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 17:04
标题: 如何看样品病毒检测报告电泳图?
本帖最后由 leikunnuy 于 2013-12-22 21:49 编辑

        今年以来,很多药店兄弟反应,研究所下发的检测报告,电泳图看不懂,在这里简单给大家说明一下:
        首先,我们做病毒检测是通过PCR(RT-PCR)方法(这种方法特异、敏感、准确、时间短),目前研究所能够准确检测的水产动物病毒有WSSV(预扩增片段长296bp)、TSV(预扩增片段长231bp)、IHHNV(预扩增片段长356bp)、BPV(预扩增片段长380bp)、GCRV(预扩增片段长218bp)、ISKNV(预扩增片段长570bp)、RSIV(预扩增片段长570bp)、KHV(预扩增片段长292bp)、MrNV(预扩增片段长898bp)、CyHV-II(预扩增片段长345bp)以及粘孢子虫(预扩增片段长530bp)。这些方法的特异性、敏感性和准确性都已经经过反复验证,能够用于临床病料的准确检测。
       当PCR结束后,我们就要对PCR产物进行电泳,与DNA分子质量标准(DL2000 DNA Marker )比对,观察相应点样孔是否出现目的条带(预扩增片段长),同时设立阳性对照和阴性对照,以此来判断样品中某种病毒是阳性还是阴性。

图片.jpg (104.9 KB, 下载次数: 44)

PCR电泳图

PCR电泳图

作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 17:26
[attach]7141[/attach]      以一份南美白对虾样品检测WSSV为例:
  当我们收到病料时,首先对病料进行处理,反复冻融,让细胞破裂,病毒释放出来,再用酚—氯仿法抽提病毒的DNA,以抽提的DNA作为模板,加入相应的检测试剂盒检测WSSV的引物,进行PCR检测,PCR完成后,通过琼脂糖凝胶电泳,看是否出现目的条带(大小为296bp),来判断检测样品WSSV是否为阳性。
      如下图所示:
      电泳图左边的标记为DNA分子质量标准(DL2000 DNA Marker)相应片段的大小。电泳图下边的标记M为DL2000 DNA Marker的样品孔,1~6分别为6份南美白对虾样品WSSVPCR产物的样品孔,从图中可以看出,2和3两个样品中出现了大为296bp的目的片段(在250bp和500bp之间,切靠近250bp),因此就可判定2和3两份样品WSSV呈阳性。

WSSV PCR检测电泳图.jpg (26.22 KB, 下载次数: 57)

WSSV PCR检测电泳图.jpg

作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 17:29
本帖最后由 leikunnuy 于 2013-12-22 17:30 编辑

检测的结果一般都是用阳性和阴性来说明,阳性就表示有病毒,阴性就表示没有病毒。(如果哪天你到医院检查,医生告诉你HIV呈阳性,那你就完蛋了。
作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 17:33
不知道这样的帖子放在哪个版块,就冒昧的利用一下鱼病版块发个帖子。
作者: tangsl    时间: 2013-12-22 18:40
leikunnuy 发表于 2013-12-22 17:33
不知道这样的帖子放在哪个版块,就冒昧的利用一下鱼病版块发个帖子。

放的位置正确,学习。
作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 18:59
关于病毒检测报告,还有不懂的,欢迎大家在论坛留言,我们会在第一时间给大家解释。
作者: 孙小广    时间: 2013-12-22 21:26
对的 非常好啊       这样的知识应该多科普科普
作者: leikunnuy    时间: 2013-12-22 21:44
孙小广 发表于 2013-12-22 21:26
对的 非常好啊       这样的知识应该多科普科普

希望这样说了,大家都能看懂,那就好了。
作者: leikunnuy    时间: 2013-12-26 10:41
真心希望大家都学习一下,明年我们会严格送样要求,同时,我们也会给各个送样药店发送完整的检测报告,有些报告是要给养殖户看的,养殖户看不懂的话,就需要药店的兄弟给解释了。




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