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标题: 如何看样品病毒检测报告电泳图？ [打印本页]

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 17:04
标题: 如何看样品病毒检测报告电泳图？
本帖最后由 leikunnuy 于 2013-12-22 21:49 编辑

      今年以来，很多药店兄弟反应，研究所下发的检测报告，电泳图看不懂，在这里简单给大家说明一下：
      首先，我们做病毒检测是通过PCR（RT-PCR）方法（这种方法特异、敏感、准确、时间短），目前研究所能够准确检测的水产动物病毒有WSSV（预扩增片段长296bp）、TSV（预扩增片段长231bp）、IHHNV（预扩增片段长356bp）、BPV（预扩增片段长380bp）、GCRV（预扩增片段长218bp）、ISKNV（预扩增片段长570bp）、RSIV（预扩增片段长570bp）、KHV（预扩增片段长292bp）、MrNV（预扩增片段长898bp）、CyHV-II（预扩增片段长345bp）以及粘孢子虫（预扩增片段长530bp）。这些方法的特异性、敏感性和准确性都已经经过反复验证，能够用于临床病料的准确检测。
   当PCR结束后，我们就要对PCR产物进行电泳，与DNA分子质量标准（DL2000 DNA Marker ）比对，观察相应点样孔是否出现目的条带（预扩增片段长），同时设立阳性对照和阴性对照，以此来判断样品中某种病毒是阳性还是阴性。

图片.jpg (104.9 KB, 下载次数: 64)

PCR电泳图

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 17:26
[attach]7141[/attach]    以一份南美白对虾样品检测WSSV为例：
　　当我们收到病料时，首先对病料进行处理，反复冻融，让细胞破裂，病毒释放出来，再用酚—氯仿法抽提病毒的DNA，以抽提的DNA作为模板，加入相应的检测试剂盒检测WSSV的引物，进行PCR检测，PCR完成后，通过琼脂糖凝胶电泳，看是否出现目的条带（大小为296bp），来判断检测样品WSSV是否为阳性。
   如下图所示：
   电泳图左边的标记为DNA分子质量标准（DL2000 DNA Marker）相应片段的大小。电泳图下边的标记M为DL2000 DNA Marker的样品孔，1~6分别为6份南美白对虾样品WSSVPCR产物的样品孔，从图中可以看出，2和3两个样品中出现了大为296bp的目的片段（在250bp和500bp之间，切靠近250bp），因此就可判定2和3两份样品WSSV呈阳性。

WSSV PCR检测电泳图.jpg (26.22 KB, 下载次数: 75)

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 17:29
本帖最后由 leikunnuy 于 2013-12-22 17:30 编辑

检测的结果一般都是用阳性和阴性来说明，阳性就表示有病毒，阴性就表示没有病毒。（如果哪天你到医院检查，医生告诉你HIV呈阳性，那你就完蛋了。

）

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 17:33
不知道这样的帖子放在哪个版块，就冒昧的利用一下鱼病版块发个帖子。

作者: tangsl 时间: 2013-12-22 18:40

leikunnuy 发表于 2013-12-22 17:33
不知道这样的帖子放在哪个版块，就冒昧的利用一下鱼病版块发个帖子。

放的位置正确，学习。

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 18:59
关于病毒检测报告，还有不懂的，欢迎大家在论坛留言，我们会在第一时间给大家解释。

作者: 孙小广 时间: 2013-12-22 21:26
对的非常好啊这样的知识应该多科普科普

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-22 21:44

孙小广发表于 2013-12-22 21:26
对的非常好啊这样的知识应该多科普科普

希望这样说了，大家都能看懂，那就好了。

作者: leikunnuy 时间: 2013-12-26 10:41
真心希望大家都学习一下，明年我们会严格送样要求，同时，我们也会给各个送样药店发送完整的检测报告，有些报告是要给养殖户看的，养殖户看不懂的话，就需要药店的兄弟给解释了。

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