水产医院论坛

标题: 《虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测》 [打印本页]

作者: leikunnuy 时间: 2016-5-2 18:29
标题: 《虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测》
《虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测》

摘要： 根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei) (EHP) SSU rDNA序列设计1对特异性引物，建立并优化了EHP的SYBR Green I实时荧光定量PCR (qPCR)检测方法。结果显示，该方法在60℃的退火温度时扩增效果最好，产物的熔解曲线为1个单峰，构建的方法对8.3×101–8.3×108 copies/µl的EHP SSU rDNA片段的检测响应具有良好的线性关系，扩增产物阈值循环数(Ct)与模板起始量的对数[log(Sq)]的关系为Ct=–3.369 log(Sq)+39.364 (R2=0.992)，扩增效率为98.1%，检测灵敏度下限为8.3×101 copies/µl，在线性范围内具有良好的组内和组间重复性。对实际样品的检测表明该方法比已报道的套式PCR的检测灵敏度约高4倍。利用本方法对采集自江苏、海南和山东的3批凡纳滨对虾样品的肝胰腺组织DNA (HpDNA)中的EHP SSU rDNA进行了qPCR检测，结果显示，EHP的载量指数与对虾生长速率呈负相关关系，肝胰腺中EHP载量在103 copies/(ng HpDNA)时代表了较高的风险水平。本研究建立的qPCR方法具有特异、灵敏、快速、定量的优点，所建立的方法及检测数据可为EHP的防控提供技术参考。

摘自：《渔业科学进展》，2016，37（2）：119-126。

肝胰腺中EHP载量在103 copies/(ng HpDNA)时代表了较高的风险水平。

作者: leikunnuy 时间: 2016-5-2 18:31
别人的实验室数据比我们的实验室数据还是要细得多。

作者: tangsl 时间: 2016-5-3 08:47
这个工作做的相当不错！“EHP的载量指数与对虾生长速率呈负相关关系”，说明这个虫对生长有影响。

作者: leikunnuy 时间: 2016-5-3 09:47

tangsl 发表于 2016-5-3 08:47
这个工作做的相当不错！“EHP的载量指数与对虾生长速率呈负相关关系”，说明这个虫对生长有影响。

现在还下载不下来这篇文章的全文，要是能下载下来全文，再看看他们具体是怎么做的，也给我们以后的实验提供一些方法参考。

作者: leikunnuy 时间: 2016-5-3 09:53
文章全文，感兴趣的可以下载下来看看。

虾肝肠胞虫_Enterocyto_省略_检测方法的建立及对虾样品的检测_刘珍.pdf

953.08 KB, 下载次数: 170

作者: tangsl 时间: 2016-5-3 10:00
黄捷研究员的学生做的工作，这才是正事。希望不久有这个虫子的流行病学资料公布，为防和治提供理论依据和指导。

作者: leikunnuy 时间: 2016-5-3 10:11

tangsl 发表于 2016-5-3 10:00
黄捷研究员的学生做的工作，这才是正事。希望不久有这个虫子的流行病学资料公布，为防和治提供理论依据和指 ...

这个是一个研究生的毕业课题，刚看了一下她的全文，做的还是很不错的。
确实，我们现在只能做检测，今年也检测出来了一些阳性样品，寄生虫的防治应该要考虑一下中间宿主的问题，但是这些都还不清楚的，

欢迎光临水产医院论坛 (http://bbs.liyang-tech.com:16882/)