[每周一例]小棚土塘养殖罗非鱼败血症分离出创伤弧菌

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[病例561]河北省黄骅市南排河镇一口小棚土塘罗非鱼养殖池，面积1.5亩，平均水深1.8米，水源为地下井水，养殖水体盐度5‰，4台1.5kW的水车式增氧机（图1）。2020年3月11日一次性放规格30～50g/尾的罗非鱼苗7500斤，投喂配合饲料，养殖到5月14日，规格达50～90g/尾。
       该池塘从3月底开始发病，刚开始时每天死鱼1-2尾，后来逐渐增多，最多时一天死鱼50多尾。发病后用二氧化氯和碘制剂消毒，效果不明显；客户自行外泼氟苯尼考，同时拌料内服氟苯尼考效果较好，能明显控制死亡量，但是要一直用，隔3天不用，死亡量增加。养殖池塘底改次数少，平时用一些调水的药物和菌制剂。
       5月14日，当日死鱼20多尾，下午5:30，塘头服务，池塘水温26.5℃，用快速水质测试盒测得水体pH值8.6、亚硝酸盐0.1mg/L、氨氮未检出。海控在手溶氧仪测得溶解氧5.78mg/L，塘边少量游水鱼。从塘边捞2尾游水鱼（图2），观察2尾病鱼症状都为腹鳍充血（图3），眼睛充血，解剖见鳃无明显异常（图4），鳃盖內缘出血；肠内无食物，肠腔充满无色透明积液（图5）；肝脏、肾脏严重充血、胆囊充盈发黑（图6、7）。从病鱼的肝脏和肾脏中接种胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养皿进行细菌分离培养，并取肝脏、脾脏和肾脏组织用95%酒精固定保存，带回研究所实验室进行病毒检测。
       结果显示：采用普通RT-PCR方法，对采集的2尾病鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织进行罗湖病毒检测，结果均为阴性。经28℃培养28h，TSA培养皿中长出圆形光滑、隆起、湿润、边缘整齐的半透明的菌落（图8），革兰氏染色结果为阴性的短杆菌（图9），经过16S rDNA测序鉴定为创伤弧菌（Vibrio vulnificus）。药敏试验结果显示该分离菌对“出败康”、“代金康”、“菌炎好迪”、“氟多力”、“辛普康”等药物敏感（图10）。
       5月27日，电话回访，反映近段时间一直坚持内服“氟苯尼考”，但池塘每天仍然有少量死鱼。

       分析：1、创伤弧菌(Vibrio vulnificus) 广泛存在于近海及河口环境中，是一种单极端单鞭毛、无芽孢的嗜盐性革兰氏阴性条件致病菌，有报道感染多种海水养殖鱼类，在水温18～20℃时感染力较强，在咸淡水中对罗非鱼有较强的感染性，本案例中罗非鱼养殖盐度为5‰，发病水温为26℃，与黎烔等（2011）报道发病水温25℃相近，初步判断罗非鱼是由创伤弧菌感染引起慢性死亡。
       2、2014年，本论坛报道在患肠炎的罗非鱼体内分离到该菌（见病例279），发病鱼均以肠道出现病变为主，天气变化和投喂不当是主要诱因，本案例中改底次数少、频繁消毒导致水质环境不稳定可能是反复发病的主要原因。（利洋公司研究所一室 雷燕 区燕云  利洋水产药店 南排河店 张杰 提供 2020.9.10）