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[每周一例]鳜“睡觉鱼”细菌和神经坏死病毒混合感染

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发表于 2019-8-22 09:36:27 | 显示全部楼层 |阅读模式
[病例514]广东珠海横山一老板养殖鳜鱼,池塘面积7亩(图1),水深1.5米,2019年7月30日放苗1.6万尾,规格2-3cm,投喂鲮鱼仔。
       7月31日,有鱼苗水面漫游或停滞,不追鱼吃,当天取6尾发病鱼从肝脏接种至胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA),进行细菌分离培养,在30℃室温条件下培养16小时,6尾鱼都长出优势菌落(图2),分离菌药敏试验结果对“出败康”敏感(图3)。
       8月1日,早上在下风口出现100-200尾鱼苗在水面漫游或侧身停滞(“睡觉鱼”),严重黒身(图4),“收肚”明显;用“速解安”+“激活”处理1次。
       8 月2日,池塘情况与前一日相同 。
       8月3日,再用“速解安”+“激活”处理1次,水面上浮和漫游鱼减少。
       8月4日,外用某种抗菌药。
       8月5日,外用某种抗菌药。
       8月6日,塘头查看,情况好转,早上下风口还有100尾左右上浮鱼,中午多数都沉下去了。中午使用简易测试盒检测水质指标正常(图5)。捞取发病鱼镜检鳃丝无虫(图6),解剖见部分鱼鳃丝贫血,有的鳔胀气,肠道有黄色积液(图7)。
       取4尾发病鱼,分别从肝脏接种至胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA),进行细菌分离培养;取脑、眼及内脏组织用95%酒精固定用于病毒检测;取脑、眼及内脏组织波恩氏液固定做组织病理切片观察。结果:30℃室温条件下培养24小时,没有长出优势菌落(图8);病鱼的眼、脑组织经深圳动检贾鹏博士和公司研究所一室PCR检测病毒性神经坏死病毒(VNNV)呈阳性,大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)、弹状病毒(SCRV)、传染性脾肾坏死病毒(ISKNV) 呈阴性;组织病理切片结果见部分发病鱼脑组织淤血,局部可见明显空泡,胃水肿,肝、肾淤血,部分肠段坏死(图9)。  
       8月12日回访,看不到上浮的病鱼。

       分析:1、本案例在放苗后次日就发病,出现上浮、漫游,未见明显打转鱼,当天肝脏的细菌分离培养结果都有大量细菌长出,说明发病前期可能以细菌病为主。
       2、实验室检测发病鱼的病毒性神经坏死病毒(VNNV)呈阳性,组织病理切片见部分病鱼脑组织有明显的细胞坏死形成空泡化,说明发病鱼不是简单的携带病毒性神经坏死病毒,至少有些鱼已经发生了病毒性神经坏死病毒病。(利洋水产药店 横山店 肖子生 邱福运  研究所 戚瑞荣 张会军 提供 2019.8.22)
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发表于 2019-8-22 14:25:01 | 显示全部楼层
本帖最后由 tangsl 于 2019-8-22 14:27 编辑

药物敏感性实验是以我们公司的产品做成药敏片来做的实验,不是标准意义上的药敏实验。也没有测量抑菌圈来判断药物的敏感性,那个抑菌圈大就认为是敏感性药物,完全从生产实用的角度出发;注意的是不要把图3中氟苯尼考和肠苷康当成敏感药物,虽然有些种类或菌株长不出来,是抑制的,但仍然有些细菌或菌株不敏感长出来了,可能长出来的菌就是致病菌,所以可能无效。从本案例来看,外用2次杀菌抑菌药物后,再没有分离到细菌,可能有效了。
唐绍林
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发表于 2019-8-22 14:37:30 | 显示全部楼层
不是每尾鱼的组织病理切片都能看到NNV的特征性病理变化(脑眼空泡化),原因一是切片操作不是连续切片,可能局部的组织的病理变化没有切到;二是靶器官除了眼脑,是否还有其它神经组织或内脏器官,虽然发病和死亡了,但致命伤害不一定在脑和眼,我们看到石斑鱼NNV发病后有一个病毒性肠炎的症状,鳜的NNV组织病理也都看到了肠道的严重病理变化;三是一个案例的病因不一定是这个病死因,流行学侧重了解疾病的诱因、病因、死因对认识疾病、防控疾病非常有意义。发病的鱼可能上到水面不能自主潜水,又发生气泡病,或者晚上缺氧,或继发细菌,或体质弱后寄生了纤毛虫,而发生死亡。
唐绍林
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