[每周一例]鳜“睡觉鱼”检出病毒性神经坏死病毒（VNNV）

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[病例513]广东省佛山市南海区丹灶镇一口鳜鱼养殖池塘，面积5亩（图1），2019年7月22日放鳜鱼苗3.3万尾，规格4cm左右，放苗时外用 “激活”抗应激，投喂鲮鱼仔。
       放苗之后多为白撞雨天气，水温大约29～32℃，一直没有调水稳水，也没有用过其他药物。
       7月27日，发现少量桂花鱼苗不吃鱼仔，“收肚”明显，有部分鱼上浮平游，之后在水面侧躺，养殖户称为“睡觉鱼”；用“优肽”1瓶/亩处理一次。
       7月28日，不追鱼吃，少量死亡；
       7月29日，死亡约120多尾；
       7月30日，水温30℃，死亡约120尾；
       7月31日，中午水温30.4℃，估计死亡100尾，上午11点塘头检测水质指标，pH值8.0，亚硝酸盐0.15mg/L，氨氮无（图2），溶氧7.01mg/L，追鱼吃食情况好了很多。水面上能看到部分平游鱼和“睡觉鱼”（图3），少数严重黑身的病鱼沿圆形轨迹快速打转。多数发病鱼黑身，腹部凹陷（“收肚”），有的眼睛充血或出血而发红，有的肛门发红。解剖见空肠空胃，部分鱼肠道有黄色积液（图4）。
取6尾发病鱼，分别从肝脏和脑组织接种至胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），进行细菌分离培养；取脑、眼及内脏组织用95%酒精固定PCR方法检测病毒；取脑、眼及内脏组织波恩氏液固定做组织病理切片观察。结果：30℃室温条件下培养24小时，部分病鱼脑和肝脏长出优势菌落（图5），经16S rDNA测序鉴定，编号“1-1脑”为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）；“1-3肝”为透明藉伏氏菌（Vogesella perlucida），“1-5肝”为气单胞菌属（Aeromonas sp.）；病鱼的眼、脑组织经深圳动检贾鹏博士和公司研究所一室PCR检测病毒性神经坏死病毒（VNNV）呈强阳性，弹状病毒（SCRV）、传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、大口黑鲈虹彩病毒（LMBV）呈阴性；组织病理切片结果见发病严重的鱼脑组织和眼组织细胞坏死，形成空泡或空泡化，部分发病鱼肠道上皮崩解（图6）。  
       8月2日，泼洒 “优肽”1瓶/亩，每天1次，连续2次，之后死亡逐渐减少，情况好转。

       分析：1、今年广东鳜鱼养殖区都发生了一种以在水面“睡觉”为主要症状的鳜鱼疾病，大家习惯上称“睡觉病”或“睡觉鱼”，池塘发病率较高，病因也说法不一。本案例通过现场发病鱼的症状观察、多个发病池塘的流行病学调查和实验室检测结果，初步诊断该病是由病毒性神经坏死病毒引起的。
       2、现场细菌分离培养结果表明，本案例发病鱼已经继发细菌感染，鉴定的3株细菌的致病性尚不清楚，在本案例中鳜鱼苗发病和死亡中起到的作用尚不明确。（利洋水产药店 丹灶店 梁万里 研究所 戚瑞荣 张会军 王小霞 提供 2019.8.15）