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中华绒螯蟹细菌性病原的分离和鉴定  点击下载此帖子已被 w8210 在 2006-3-21 09:24 编辑过］

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很难得，不错

liyang

中华绒螯蟹颤抖病病原的初步研究  何介华　贺　路　曾令兵　周剑光
　摘　要　本文作者将发生颤抖病的中华绒螯蟹内脏匀浆，30000r.p.m离心30分，将沉淀重悬，细菌过滤器过滤后，注射病蟹内脏接种健康的中华绒 螯蟹进行人工感染试验，感染蟹表现出与野外发病中华绒螯蟹同样的症状。超薄切片后，电子显微镜下在细胞质中可观察到病毒样颗粒及略小于细胞核大小的病毒包埋体样结构。
　关键词　中华绒螯蟹，颤抖病，超薄切片，病毒样颗粒，病毒包埋体样结构
　　近几年来，中华绒螯蟹在全国一些地区进行了大规模池塘养殖，特别是在江苏和安徽等省，随着中华绒螯蟹池塘养殖的进一步发展，其病害也进一步突显出来，其中中华绒螯蟹的颤抖病在很多养殖场呈暴发性的流行，导致了蟹农沉重的经济损失，严重制约了养蟹业的发展，本文是对其病原研究的一个初报。
材料和方法
　1 材料
  1.1　病蟹：采自江苏盱眙县鲍集乡大嘴村螃蟹养殖场发病池中呈典型颤抖症状的病蟹。
  1.2　健康蟹：采自湖北沙市长湖，规格为50克左右，饲养于不断充气的水箱中(50升)，水温控制在26-28℃，每水箱中饲养6只，每天喂以甲鱼饲料。
  2　方法
  2.1　无菌滤过病蟹组织悬液的制备　将病蟹的内脏(胃，肠，肝胰脏，鳃)加等体积的生理盐水在组织匀浆器中匀浆，分析滤纸过滤，经30000 r.p.m离心30分，沉淀用生理盐水重悬，细菌过滤器(孔径0.22微米)过滤后(取数滴于肉汤培养基中28℃培养进行无菌检验 )加双抗处理备用。
  2.2　人工感染　经健康蟹第四步足的第一关节将上述无菌滤过病蟹组织悬液0.1毫升注射 进体腔中。连续观察螃蟹的活动情况。对照组每只在相同的部位注射生理盐水0.1毫升。
  2.3　超薄切片的电子显微镜观察　病蟹组织经戊二醛、四氧化锇固定，包埋，超薄切片， 染色后在电子显微镜下进行观察   
  结果和讨论
  1　结果
  1.1　无菌滤过病蟹组织悬液经肉汤培养基28℃培养没有发现细菌生长。
  1.2　临床症状　在接种后的第11天，病蟹在水中表现出运动迟缓，不食，间歇性的全身颤抖，离水后可观察到步足颤抖并且全身缩成一团，不能运动，在第十六天开始死亡。对照组螃蟹照常摄食，运动正常。
  1.3　电子显微镜观察　在电子显微镜下看到细胞质内质网上有大量的病毒样颗粒(图1)，在细胞质中可观察到比细胞核略小的病毒包埋体样结构(图2)。而在细胞核内没有观察到病毒样颗粒及病毒包埋体样结构。
  2　讨论　　无菌滤过病蟹组织悬液经肉汤培养基28℃培养没有发现细菌生长说明无菌过滤是成功的，而人工接种无菌滤过病蟹组织悬液导致健康蟹出现典型颤抖症状，这说明此病可能是病毒病原所致。电子显微镜下观察到在细胞质内存在大量的病毒样颗粒及病毒包埋体样结构能进一步证明病毒病原存在的可能性。中华绒螯蟹颤抖病的病理组织学观察及病原的分离纯化工作正在进行中。

图1　发生颤抖病的中华绒螯蟹胃组织超薄切片电镜观察×20，000倍

图2　发生颤抖病的中华绒螯蟹胃组织超薄切片电镜观察×20，000倍《参考文献》
[1] Vago.C.1966.A virus disease in crustacea.Nature(London).209 ,1290
[2] 吕鸿声，1982。昆虫病毒与昆虫病毒病。科学出版社，p344-351

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好東西，謝謝分享：）