[每周一例]甲鱼“脖子无力”，分离出蜡样芽孢杆菌

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[病例756]江西抚州南丰一甲鱼养殖场，共有31口池塘，总面积约40亩，每口面积约1.2亩（图1），水深0.8米，未配备增氧设备。2023年3月放养甲鱼约50000只，规格1.8斤/只，全年死亡约15000只。2024年3月补放甲鱼约5000只，规格约2斤/只，存塘量约40000只，平均规格约2斤/只。4月份连续阴雨天，甲鱼出现零星死亡，期间使用过“醛立灭”“疮口平”“永乐碘”等消毒剂，效果一般。
       4月27日，使用“碧水安（超强型）”1kg/亩解毒。
       4月30日-5月4日，阴，停料，每天死亡50～60只。
       5月5日，阴，气温17～24℃，死亡84只。外用“疮口平”0.5kg/亩+“片片氧”0.4kg/亩，并使用20袋“出败康200g”+10袋“氟多力200g”拌粉料240斤内服。
       5月6日，晴，气温19～30℃，死亡104只，内服用药同上。
       5月7日，晴，气温19～28℃，死亡119只。使用20袋“出败康200g”+20袋“菌毒好迪200g”拌200斤颗粒料内服。
       5月8日，阴，气温18～29℃，死亡约100只。取3只爬坡甲鱼，观察脖子无力，腹部微微发红（图2），其中1只眼睛白浊（图3）。解剖发现有腹水，肠道充血，肝脏发黑（图4），脾脏肿大（图5），腮腺组织充血发红（图6）。分别接种病鱼肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织及腹水于胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）上进行细菌分离培养，并取肝脏、脾脏、心脏、肠道分别用95%酒精固定保存做病毒检测，4%甲醛溶液固定做病理检测。
       结果：采用实验室（RT-）PCR检测方法，对采集的3只甲鱼的肝脏、脾脏、心脏、肾脏进行中华鳖虹彩病毒（STIV）、中华鳖黄病毒、弹状病毒（SCRV）检测，结果均为阴性（图7）。经室温培养18h后，3只甲鱼的肝脏、脾脏、心脏、肾脏、腹水中均分离出圆形、隆起、边缘不整齐、表面粗糙有蜡样光泽的灰白色大菌落（图8），革兰氏染色为阳性大杆菌，菌体两端较平整，成双链或短链状排列（图9），经16SrDNA测序初步鉴定为蜡样芽孢杆菌。药敏试验结果显示该分离菌对“肠苷康”“氟多力”“菌炎好迪”“出败康”敏感。组织病理切片结果显示肝脏、脾脏、肠道、心脏组织细胞均有不同程度的坏死、变性，均发现较多嗜酸性粒细胞，其中肝脏、脾脏组织内多处可见多量蓝紫色杆状细菌（图10）。
       5月9日，阴，气温20～29℃，死亡约50只。使用2袋“营养快线500g”+2瓶“LY-生命素250g”+5袋“肝胆易康200g”拌颗粒料200斤内服连续7天。
       5月10-15日，天气阴晴不定，气温17～30℃，每天死亡约30～50只。
       5月16-19日，晴，气温18～33℃，每天死亡130～150只。每天使用20袋“出败康200g”+20袋“菌毒好迪200g”拌颗粒料200斤内服。
       5月20日，雨，气温22～30℃，死亡约100只。使用“利福平”+未知抗生素拌颗粒料200斤内服。
       5月21-23日，雨，气温21～27℃，每天死亡80～90只。每天使用氟苯尼考+庆大霉素+强力霉素拌颗粒料200斤内服。
       5月24日，晴，气温23～32℃，死亡约150只，用药同上。
       5月25日，晴，气温24～33℃，每天死亡约104只，每天使用500g恩诺沙星+500g阿莫西林拌颗粒料200斤内服6天。当天取2只爬坡甲鱼，解剖后取内脏组织进行细菌分离培养，再次经16S rDNA测序鉴定为蜡样芽孢杆菌。
       5月26-30日，气温20～34℃，死亡量从106只/天降低70多只/天。
       5月31日，雨，气温22～30℃，死亡66只。使用500g恩诺沙星+500g阿莫西林+10袋“肠苷康200g”拌颗粒料200斤内服。
       6月1-3日，气温18～30℃，使用“营养快线500g”2袋+“LY-生命素250g”2瓶+“肠苷康200g”10袋拌颗粒料200斤内服3天。死亡从48只/天降低到30只/天。之后回访，老板反映甲鱼死亡量逐渐下降。

       分析：1、蜡样芽孢杆菌是一种条件致病菌，在水体环境中广泛分布，能引起多种水产养殖动物发病，甲鱼感染后表现症状包括腹甲有出血斑、颈部充血肿大、四肢无力、反应迟钝等，与本案例发病甲鱼症状表现基本一致。
       2、该基地大多数为去年发病后存活的甲鱼，可能体内带有病原菌。4月份天气频繁变化，昼夜温差较大，甲鱼出现应激反应，导致发病死亡。从发病甲鱼内脏器官中均分离出蜡样芽孢杆菌，同时内服敏感抗菌药物治疗有效，判断是由蜡样芽孢杆菌引起的发病。（利洋公司 技术部 徐保星 利洋水产药店 南丰店 舒棋 提供 2024.10.10）

tangsl

蜡样芽孢杆菌，在甲鱼上分离出频率较高，是革兰式阳性菌，选择药物时注意。

liangweijian

蜡样芽孢杆菌是条件致病菌，主要还是环境问题，甲鱼体质问题，环境变化大，应激，甲鱼体质下降，就有可能感染发病

徐保星

甲鱼抗病能力较强，出现症状时基本上已到中后期，定期带鱼上店检测十分重要

hanfj

蜡样芽孢杆菌广泛分布于土壤及水域中，在水质不良、温度变化、甲鱼免疫力下降情况下可发生感染，并引起死亡。

suotonghao

蜡样芽胞杆菌属于条件致病菌，甲鱼感染后表现症状包括腹甲有出血斑、颈部充血肿大、四肢无力、反应迟钝等