【技术分享】水产动物常见致病菌的初步鉴定方法

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水产动物常见致病菌的初步鉴定方法

王小霞

       细菌病是水产养殖动物的重要疾病，治疗不同的细菌性疾病需要使用不同的抗菌类药物，实验室菌种鉴定过程用时较长，对于一些急性发病池塘，完成细菌鉴定后再进行处理，会造成较大经济损失，对于一些常见的致病菌，我们可以通过细菌培养时间、菌落形态及革兰氏染色观察做出初步鉴定，再结合发病动物症状、流行特点等对细菌病的种类做出初步诊断，可以快速进行现场处理。笔者根据经验，整理出初步鉴别细菌种属的方法，为养殖池塘细菌病处理提供一些参考。
       一、气单胞菌
       1、培养特性
       气单胞菌经29℃培养18h，在黄色的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上生长旺盛，菌落直径可达2mm左右，在绿色的硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)上不生长或形成营养不良小菌落。
       2、菌落形态
       大部分气单胞菌在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成圆形光滑、边缘整齐、湿润、稍隆起不透明或半透明灰白色或黄色馒头状大菌落，且无法在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)上生长。

图1  气单胞菌在TSA培养基上菌落形态

       嗜水气单胞菌较为特殊，在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成灰白色不透明大菌落，在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基（TCBS）上形成黄色生长不良小菌落。

图2  嗜水气单胞菌在TSA培养基上菌落形态

       3、革兰氏染色形态
       气单胞菌为革兰氏染色阴性、两端钝圆的直杆菌或球杆菌，单个、成双或以短链形式排列。

图3  气单胞菌革兰氏染色形态

       二、弧 菌
       1、培养特性
       弧菌经29℃培养18h，在黄色的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）及绿色的硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)上均生长旺盛，菌落直径一般在1mm以上。
       2、菌落形态
       弧菌在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成圆形、稍隆起、湿润透明或半透明灰白色菌落，形成圆形、隆起的湿润黄色或绿色菌落，48h后干瘪、下陷，表面褶皱且无光泽。常见的副溶血弧菌、创伤弧菌在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基（TCBS）上形成绿色菌落，哈维氏弧菌、溶藻弧菌在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基（TCBS）上形成黄色菌落。

图4   弧菌在TSA培养基上菌落形态

       拟态弧菌较为特殊，在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成圆形、隆起、湿润透明菌落，形态极像树叶上的露珠。

图5  拟态弧菌在TSA培养基上菌落形态

       3、革兰氏染色形态
       弧菌革兰氏染色阴性，杆状或短杆状，多数菌体稍弯曲，有一端或两端稍尖，散在或个别成双排列。

图6  弧菌革兰氏染色形态

       三、链球菌
       1、培养特性
       链球菌经28℃-35℃培养12小时左右，在黄色的脑心浸液琼脂培养基（BHIA）上生长旺盛，菌落直径约为1mm左右，在黄色的胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成透明针尖大小的菌落，有的需对着光才能看清。
       2、菌落形态
       链球菌在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成圆形、边缘整齐、湿润，针尖大小的透明小菌落。

图7  链球菌在TSA培养基上菌落形态

       3、革兰氏染色形态
       链球菌为革兰氏染色阳性球菌，单个或链状排列。

图8  链球菌革兰氏染色形态

       四、诺卡氏菌
       1、培养特性
       诺卡氏菌经25℃培养48h～72h，才可在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上长出少量沙粒状菌落。
       2、菌落形态
       诺卡氏菌在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成沙粒状、干燥、不透明橘色或黄色边缘不整齐菌落。

图9  诺卡氏菌在TSA培养基上菌落形态

       3、革兰氏染色形态
        诺卡氏菌为革兰氏染色阳性丝状菌，单个、成对Y或V字状排列。

图10  诺卡氏菌革兰氏染色形态

       五、爱德华氏菌
       1、培养特性
       迟缓爱德华氏菌经25℃培养24h，在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上生长旺盛，直径小于1mm，鮰爱德华氏菌在25℃-30℃培养48h才能在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成针尖大小的菌落。
       2、菌落形态
       迟缓爱德华氏菌在胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）上形成圆形、边缘整齐、光滑、湿润半透明或透明的灰白色小菌落。

图11  爱德华氏菌在TSA培养基上菌落形态

       3、革兰氏染色形态
       爱德华氏菌为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，单个或双个排列。

图12   爱德华氏菌革兰氏染色形态

（转自“利洋水产”微信平台）

利洋小七儿

识别一些常见菌落，这在临床上很重要。

素人渔夫

规范的操作与合理的观察（培养）时间，精准分离致病菌。

leikunnuy

常见的病原菌通过菌落形态和革兰氏染色结果进行初步判定很有必要的，药店做的多了就可以初步判断，再选择性用药，准确治疗。

LY-huangyu

能有个基本的判断很有用

hanfj

掌握常见致病菌的基本特征，对临床诊断很有帮助