[每周一例]鳜“睡觉鱼”细菌和神经坏死病毒混合感染

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[病例514]广东珠海横山一老板养殖鳜鱼，池塘面积7亩（图1），水深1.5米，2019年7月30日放苗1.6万尾，规格2-3cm，投喂鲮鱼仔。
       7月31日，有鱼苗水面漫游或停滞，不追鱼吃，当天取6尾发病鱼从肝脏接种至胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），进行细菌分离培养，在30℃室温条件下培养16小时，6尾鱼都长出优势菌落（图2），分离菌药敏试验结果对“出败康”敏感（图3）。
       8月1日，早上在下风口出现100-200尾鱼苗在水面漫游或侧身停滞（“睡觉鱼”），严重黒身（图4），“收肚”明显；用“速解安”+“激活”处理1次。
       8 月2日，池塘情况与前一日相同 。
       8月3日，再用“速解安”+“激活”处理1次，水面上浮和漫游鱼减少。
       8月4日，外用某种抗菌药。
       8月5日，外用某种抗菌药。
       8月6日，塘头查看，情况好转，早上下风口还有100尾左右上浮鱼，中午多数都沉下去了。中午使用简易测试盒检测水质指标正常（图5）。捞取发病鱼镜检鳃丝无虫（图6），解剖见部分鱼鳃丝贫血，有的鳔胀气，肠道有黄色积液（图7）。
       取4尾发病鱼，分别从肝脏接种至胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），进行细菌分离培养；取脑、眼及内脏组织用95%酒精固定用于病毒检测；取脑、眼及内脏组织波恩氏液固定做组织病理切片观察。结果：30℃室温条件下培养24小时，没有长出优势菌落（图8）；病鱼的眼、脑组织经深圳动检贾鹏博士和公司研究所一室PCR检测病毒性神经坏死病毒（VNNV）呈阳性，大口黑鲈虹彩病毒（LMBV）、弹状病毒（SCRV）、传染性脾肾坏死病毒(ISKNV) 呈阴性；组织病理切片结果见部分发病鱼脑组织淤血，局部可见明显空泡，胃水肿，肝、肾淤血，部分肠段坏死（图9）。  
       8月12日回访，看不到上浮的病鱼。

       分析：1、本案例在放苗后次日就发病，出现上浮、漫游，未见明显打转鱼，当天肝脏的细菌分离培养结果都有大量细菌长出，说明发病前期可能以细菌病为主。
       2、实验室检测发病鱼的病毒性神经坏死病毒（VNNV）呈阳性，组织病理切片见部分病鱼脑组织有明显的细胞坏死形成空泡化，说明发病鱼不是简单的携带病毒性神经坏死病毒，至少有些鱼已经发生了病毒性神经坏死病毒病。（利洋水产药店 横山店 肖子生 邱福运  研究所 戚瑞荣 张会军 提供 2019.8.22）

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药物敏感性实验是以我们公司的产品做成药敏片来做的实验，不是标准意义上的药敏实验。也没有测量抑菌圈来判断药物的敏感性，那个抑菌圈大就认为是敏感性药物，完全从生产实用的角度出发；注意的是不要把图3中氟苯尼考和肠苷康当成敏感药物，虽然有些种类或菌株长不出来，是抑制的，但仍然有些细菌或菌株不敏感长出来了，可能长出来的菌就是致病菌，所以可能无效。从本案例来看，外用2次杀菌抑菌药物后，再没有分离到细菌，可能有效了。

tangsl

不是每尾鱼的组织病理切片都能看到NNV的特征性病理变化（脑眼空泡化），原因一是切片操作不是连续切片，可能局部的组织的病理变化没有切到；二是靶器官除了眼脑，是否还有其它神经组织或内脏器官，虽然发病和死亡了，但致命伤害不一定在脑和眼，我们看到石斑鱼NNV发病后有一个病毒性肠炎的症状，鳜的NNV组织病理也都看到了肠道的严重病理变化；三是一个案例的病因不一定是这个病死因，流行学侧重了解疾病的诱因、病因、死因对认识疾病、防控疾病非常有意义。发病的鱼可能上到水面不能自主潜水，又发生气泡病，或者晚上缺氧，或继发细菌，或体质弱后寄生了纤毛虫，而发生死亡。