【河蟹专题】河蟹微孢子虫的塘头检测方法
本帖最后由 jiayanwuu 于 2020-7-29 09:13 编辑河蟹微孢子虫的塘头检测方法
戚瑞荣
河蟹“水瘪子”每年都有发生，主要表现为头胸甲腔大量积水，全身组织水肿，肝胰腺萎缩，胃、肠内有黄色或白色内容物（俗称“拉黄”），可引起河蟹生长缓慢或大量死亡，目前“水瘪子”的病因还未明确。2016年5-7月份公司研究所一室曾对“水瘪子”的河蟹进行集中检测，检测河蟹25个批次，共计140只河蟹样品，其中96只河蟹肝胰腺中可见微孢子虫，检出率为68.57%。统计发现，肝胰腺有发白症状的河蟹其肝胰腺中均可检测到微孢子虫，可见河蟹“水瘪子”与微孢子虫有一定的关系，或者微孢子虫感染后更易发生水瘪子病，或者发生水瘪子病后更易感染微孢子虫。
近来多有药店送检河蟹检测微孢子虫，但由于河蟹上的微孢子虫种类不明确，无特定引物可用于PCR检测。目前公司研究所对于河蟹微孢子虫的检测方法为组织切片的制备与观察，但组织切片耗时太长，不适用于微孢子虫的快速检测。
多次实验发现，河蟹肝胰腺制作压片（无需染色、无需油镜）直接进行镜检可以观察有无微孢子虫。因为河蟹微孢子虫的包囊比较大，且有明显的膜包被、虫体有一定的折光性，在镜下比较容易区分，我们药店一线技术人员或者养殖户自己可以按照如下方法直接在塘头较快速的检测河蟹有无微孢子虫，省去送检耗费的时间。
1、所需材料
待检测河蟹，干净的载玻片、盖玻片，剪子，显微镜。
2、操作步骤
⑴拿一张干净载玻片、平放，用剪子剪取少量的肝胰腺，大小大约为半个黄豆大小，放入载玻片中央。
⑵拿一张干净的盖玻片盖在肝胰腺处，稍用力压平整（若没有盖玻片，载玻片可以替代盖玻片），压至看不到明显的线状肝胰腺腺管（看着透明，越薄越好）；（应保证肝胰腺湿润，若肝胰腺太干，可滴加一滴水，再进行压片）。
⑶将压好的片子放入显微镜下观察，进行“地毯式”搜寻观察。先用低倍镜（10倍物镜）观察，找到疑似目标再换高倍镜（40倍物镜）观察。
3、结果观察
肝胰腺压片镜检下的微孢子虫形态如下图：
图1河蟹肝胰腺压片100倍（10倍物镜）
箭头示微孢子虫包囊，灰绿色、密集，有明显形状
图2河蟹肝胰腺压片400倍（40倍物镜）
箭头示微孢子虫包囊（上）及包囊破裂散落的微孢子虫的单个虫体（下），灰绿色、密集，有明显形状，虫体有折光性
（转自：“利洋水产”微信平台） 之前有压片看过，怎么也看不到，现在知道了方法，下次再看就能找到了。 肝胰腺压片就能看到，确实方便检测诊断
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